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1、抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。2.适用范围检验科免疫组工作人员。3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA谱1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENPB，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体P蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗nRNP、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENPB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白和
2、AMAM2共14种不同抗原IgG类抗体。5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征），原发性胆汁性肝硬化。6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在20%到100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在20%至40%之间。因此，ANA鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病
3、的进一步诊断也很有价值。[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮（SLE)[8,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22]—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1,23],—局限型系统性硬化症（CREST综合征）[28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：成份规格规格标识1.包被抗原的检测膜条：nRNP/Sm、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENPB、
4、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMAM2。16条4x16条STRIPS2.阳性对照人IgG，100倍浓缩1x0.02ml4x0.02mlPOSCONTROL100x3.酶结合物碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，10倍浓缩1x3ml4x3mlCONJUGATE10x4.样本缓冲液直接使用1x100ml3x100mlSAMPLEBUFFER5.清洗缓冲液10倍浓缩1x50ml1x100mlWASHBUFFER10x6.底物液NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸盐），直接使用1×30ml4×30mlSUBSTRATE7.温育盘2x8
5、槽---8.产品说明书1份1份LOT试剂批号储存温度IVD体外检测未开封可稳定至8.储存条件及有效期：2-8°C保存，不要冷冻。未开封前，除非特别说明，试剂盒自生产日起可稳定18个月。稀释后的酶结合物和清洗缓冲液需在一个工作日内用完。9.样本要求样本：人血清或EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。稳定性：待检患者样本于2-8°C可稳定14天，稀释后的样本应在同一个工作日内检测。样本稀释：患者样本用样本缓冲液1:101稀释，如可取15ul血清用1.5ml样本缓冲液稀释并用漩涡混匀器充分混匀。不可用加样器混匀。10.检验方法10.1试剂的准备和稳定性注意：使用前所有试剂均必须于室
6、温（18-25°C）平衡30分钟。从第一次使用起，试剂盒如保存在2-8°C，并且在没有污染的情况下，可稳定至所标示的有效期。-包被抗原的检测膜条：直接使用。为防止膜条发生冷凝，只有当膜条平衡到室温后才可打开包装。取出膜条后应立即密封好原包装并将其保存于2-8°C。-阳性对照：100倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶中吸取所需阳性对照，用样本缓冲液1:101稀释如：15ul阳性对照用1.5ml样本缓冲液稀释并充分混匀。已稀释的阳性对照应在同一个工作日用完。-酶结合物：10倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶中吸取所需酶结合物，并用样本缓冲液1:10稀释。如需温育一条检测膜条，用1.35
7、ml样本缓冲液稀释0.15ml酶结合物。已稀释的酶结合物应在同一个工作日用完。-样本缓冲液：直接使用。-清洗缓冲液：10倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶中吸取需要量用蒸馏水1:10稀释。如需温育一条膜条，用9ml蒸馏水稀释1ml浓缩缓冲液。稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。-底物液：直接使用，对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。10.2操作流程预处理:取出所需的膜条，将其放入温育槽内。膜条上有编号的一面朝上。在温育槽中分别加入1.5ml样本缓冲液，于室温在摇摆摇床上温育5分钟后，吸去温育槽中的液体。血清温育第一次:在温
