RT-PCR技术原理

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1、RT-PCR技术原理简介张晓涛RT-PCR简介RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)即逆转录PCRRT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。RT-PCR原理掌握PCR技术。学会操作RT-PCR简介PCR仪。熟悉琼脂糖凝胶电泳技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR两种方法RT-PCR反应体系RT引

2、物的选择RT逆转录酶的选择RT-PCR操作流程1.从细胞或特定组织中提取总RNA;2.逆转录实验;3.扩增内参和目的基因并比较基因表达差异。实验流程(两步法)实验流程(一步法)RT实验要素—决定特异性和灵敏度问题(一)RT-PCR没有产物原因对策问题(二)非特异性扩增原因对策ThankYou!

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