高氧诱导小鼠视网膜新生血管动物模型探究

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1、高氧诱导小鼠视网膜新生血管动物模型探【摘要】目的：探讨用C57BL小鼠建立高氧诱导的早产儿视网膜病变（ROP）动物模型，为研究该病的发病机制及治疗提供成熟的研究对象。方法：鼠龄为7天的新生C57BL小鼠随机分组，每组20只小鼠，将实验组小鼠置于密闭氧仓中饲养，氧仓连接氧浓度测量仪，保持氧箱内氧浓度为75±2%,5天后将小鼠取出置于常氧环境中饲养。对照组小鼠置于普通空气中饲养。两组小鼠均在出生后17天将小鼠处死，行眼球病理切片HE染色、视网膜新生血管细胞核计数及APD染色视网膜铺片，了解视网膜新生血管的形成情况。结果：正常对照组小鼠的视网膜组织切片中，内界膜清晰、连续，突破视网膜

2、内界膜的血管内皮细胞核极少，平均每张切片中为1.2±0.75个。实验组鼠视网膜组织切片中显示视网膜表面高低不平，较多突破内界膜的血管内皮细胞核，平均每张切片中新生血管内皮细胞核数为34.58±6.15个，与对照组相比，差异有非常显著的统计学意义。在视网膜铺片中对照组的视网膜血管发育成熟，自视盘发出向周边呈放射状均匀分布，血管形态及管径正常，分支血管发育良好。实验组可见视网膜血管迂曲变细，分布紊乱、周边大量无灌注区及新生血管芽形成。结论：高氧诱导的小鼠可成功形成视网膜新生血管，可以作为早产儿视网膜病变研究的成熟动物模型。【关键词】高氧，早产儿视网膜病变，视网膜新生血管，动物模型【

3、中图分类号IR774.1【文献标识码】A【文章编号】1004-7484(2012)12-0023-02早产儿视网膜病变(retinopathyofprematurity,R0P)是指新生儿视网膜血管异常增殖所致的一类疾病，是导致新生儿失明的最重要原因。［1,2］目前，该病的发病机制仍不明确。目前国内外对于R0P的最佳治疗仍局限于对阈值或阈值前病变进行光凝或冷凝，尽管如此仍有10%〜15%的重症患儿最终失明［3,4］。因此，深入研究R0P的病理变化和发病机制，并采取有效措施阻断这一关键步骤，必将有利于R0P的治疗，对提高早产儿生存质量具有重要和实际的意义。同时在R0P的研究中选择

4、一种合适的动物模型是R0P研究的重要实验基础。1994年Smith等设计的小鼠氧诱导视网膜病模型方法简单，可行性好，成功率高，因此该动物模型在R0P研究中得到了广泛的应用。本研究在此基础上，建立了氧诱导下的简单实用的R0P小鼠模型，以便进一步研究R0P的发病机制及研究其干预手段。1实验动物和方法1.1实验动物健康C57BL/6J小鼠40只，鼠龄为7天，性别不限，与母鼠共同饲养，系清洁级动物。将无毒透明塑料箱的两端打孔，一端连接氧气，另一端连接测氧仪，两端连接处及箱盖与箱体连接处使用胶带封闭，塑料箱底铺石灰颗粒与木屑，保持容器内干燥。1.2实验方法1.2.1动物模型的建立和分组将

5、其分为两组：⑴高氧组⑵正常对照组，每组幼鼠数量为20只，雌雄不限。高氧组的C57BL/J6小鼠出生后第七天，将实验幼鼠及哺乳母鼠放于塑料箱中暴露于75%氧气共5天，出生后第12天将小鼠转入正常空气房间。至出生后17天将小鼠处死，行眼球病理切片及视网膜铺片。1.2.2病理标本制作及视网膜新生血管细胞核计数小鼠眼球常规于眼球甲醛固定液中固定，固定48小时候，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，做一系列连续切片，厚度4-6微米，任意选取不包括视乳头的20张病理切片，在低倍镜下统计平均每张眼球切片突破视网膜内界膜而长入玻璃体内的血管内皮细胞核数。计数血管内皮细胞细胞核时仅计数与内

6、界膜有联系的血管内皮细胞细胞核。1.2.3ADP酶组织化学法染色的视网膜铺片小鼠处死后摘出眼球，置于10%福尔马林中12小时，在解剖显微镜下除去角膜、晶状体、脉络膜及巩膜。用毛笔扫除玻璃体以及视网膜外层的色素上皮，将游离视网膜以视乳头为中心放射状对称剪为4瓣，自来水冲洗12小时，在371水浴箱中用3%胰蛋白酶消化7小时，行ADP酶组织化学法染色，封片后行光学显微镜观察结果并照相。1.2.4统计学分析所有数据以统计分析软件SPSS16.0进行分析，数据以均数土标准差（x±s）表示，采用两组独立样本t检验分析方法比较各组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目。以PW0.05为差异有显

7、著性统计学意义。2结果2.1两组视网膜血管形态的改变正常对照组的视网膜铺片中，视网膜血管基本成熟，视网膜血管自视盘发出，向周边呈放射状均匀分布，血管走行直，分支较少且结构清晰,周边部视网膜血管网结构清晰，可见到少量无灌注区。视网膜血管可见分深浅两层。浅层血管呈放射状分支分布，深层血管呈多角形网状形态，两层血管网状结构通过螺旋形的交通动脉互相连接。高氧组可见视盘发出的大血管管径变细,分支减少，走行僵直，视网膜中央可见大片无灌注区，视网膜血管丧失了正常的放射状结构，有大量的视网膜新生血管，血管分