性别鉴定_图文

《性别鉴定_图文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、PCR性别鉴定实验摘要：人类y染色体上特异性重复序列(humany-chromosomespecificrepetitiveDNAfamilysequence)是一种重复性很高的特异性序列，引物能在人类广大的基因组中对它进行特异性识别，因此，它是良好的PCR材料。本实验通过对人黏膜细胞的DNA提取、基因组DNA制备、PCR扩增y染色体上特异性重复序列、PCR产物的电泳检测的方法实现人的性别鉴定。通过此次实验，我们得到了预期结果，只有极少数因实验操作等人为失误导致实验与预期不符的情况发生，总之，用PCR技术扩增y染色体上特异性重复序列的方法是可靠的。关键词：基因组DNAPCRy染色体上

2、特异性重复序列电泳检测引言PCR(PolymeraseChainReaction)又称聚合酶链式反应，它是一种用于放人扩增特定的DNA片段的分子牛物学技术，它可看作是牛物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗昭的毛发、皮狀或血液，只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大，进行比对。鉴定性别方法有很多，巴氏小体观察法、染色体分型技术都可以对人的性别进行鉴定,但是染色体分型需要专门的技术和人才，巴氏小体鉴定人的性别准确率低，而几无法鉴别XXY、X0核型的性別。而PCR的方法操作简

3、单，准确率高。由于Y染色体是区分性別的本质，PCR可以很简便地从基因组DNA中直接获得Y染色体DNA进行分析鉴定。本实验就是通过PCR技术扩增y染色体上特异性重复序列来实现性别鉴定。人类及哺乳动物的性别决定和分化是一个复杂的过程，涉及已知和未知的多个基因。SRY基因是人类及已知许多哺乳动物中一段Y染色体特异的保守序列，人类SRY编码区全长615bp0该基因的突变将导致XY染色体女性化(特纳氏综合征)；而含有该基因的染色体片段如果易位到X染色体，则导致XX男性综合征。但是由于人类的基因组太大，有700多MB,引物耍从700多MB的序列中识别615bp的序列十分困难，因此，本实验选取的是

4、一种更容易被引物识别的序列y染色体上特异性重复序列(humany-chromosomespecificrepetitiveDNAfamilysequence)來进行PCR扩增。电泳是带电物质在电场中向着与其电荷和反的电极移动的现彖。各种生物大分子在一定pH条件下，nJ以解离成带电荷的离了，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场屮，具屮的电离子会发牛移动，移动的速度可因带电离子的大小、形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差显，就可以区別各种大小不同的分了。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA片段，是分了生物学的核心技术之一。综

5、上，本实验通过对人口腔黏膜细胞的DNA捉収、基因组DNA制备、PCR扩增y染色体上特异性璽复序列、PCR产物的电泳检测的方法实现人的性别鉴定，取得了良好的效果。正文1•材料和方法1.1材料和试剂实验材料：人口腔黏膜细胞实验试剂：ddH2O>10xBuffer>dNTP(2.5mMeach)、PrimGrF(lOpM)、PrimerR(lOpiM)、Taq酶(5U/yL)、TAE^EB、agarose,etc.实验仪器：离心机、水浴锅、涡旋振荡器、微量移液器、不同类型的枪头、1.5mLEp管、金属浴锅、制胶槽、制胶板、样品梳等1.2实验方法1.口腔上皮细胞DNA样品制备(1)取一高压过

6、的Ep管，做好标记；(2)収60"细胞裂解液至一个Ep管中；(3)先用水漱口，然后用消毒牙签(钝头)刮取口腔上皮，弃去第一次刮取物，保留第二刮取物；(4)将消毒牙签(钝头)放于Ep管细胞裂解液中快速转动，禅放细胞；(5)50°C水浴锅保温20mino(6)在等待过程中建立PCR反应体系。即取一个干净的PCR管，在冰浴中，依序加入表1屮的成分(除了模板以外其他都加好)。另外要设置阴性对照和阳性对照。阴性对照不加模板，阳性对照加入男性基因组DNA。(7)95°C金属浴保温除模版外PCR反应体系lOmino(8)12,000rpm离心除模版外PCR反应体3min,获得DNA溶液。表1PCR

7、反应体系编号组分加量(pL)1ddH2O9.62lOxBuffer2.03dNTP(2.5mMeach)1.64PrimerF(10

8、iM)0.85PrimerR(10

9、iM)0.86模版(1^10ng/nL)5.07Taq酶(5U/nL)0.2总体积20.0(9)向PCR管中加入上述DNA溶液5",用微量移液器轻轻吹洗混匀。(10)将样占占放入PCR仪中，按照表2的PCR反应条件进行目的片段DNA扩增。表2PCR反应条件项目温度时间预变性94°C3min