TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒说明书

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1、TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（通用）（BIOTIN标记POD适用于细胞.组织样本）一TUNEL检测原理凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核昔酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3-0H末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通

2、显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-0H形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。二TUNEL试剂盒组分组份20assays50assays100assays储心条件Equi1ibrationBuffer1.0ml2.5mL5.0mL-20°CBiotin-ll-dUTP20UL50UL100UL-20°CTdTEnzyme80uL200PL400uL-20°C50XProteinaseK40uL100uL200u

3、L-20°CStrcptavidin-HRPlOuL25uL50uL4°C避光DAB2mg5mg10mg-20°C注意事项1使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。2因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。3为避免试验误差.降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。4TdT酶反应液最好在使用前根据样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。5另因DAB为固体粉末，使用前加入适量PBS溶解，配制成20XDAB（10mg/ml）后，按下述方法显色使用。石蜡包埋组织切片36用户自备：二

4、甲苯.多聚甲醛.PBS.H202.TritonX-100.柠檬酸钠.复染染液：苏木素或甲基绿等.盖玻片.载玻片.染色缸。三操作流程概览说蜡2水合*蛋白SS处理A样本通透性的促进“TdT81作用下Biotin■典匕与样本DNA的标记反应心本试剂盒特点•操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有ProteinaseK和DAB。•高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。•高特异性：能特异性染色凋亡细胞。•快速操作：整体操作约需3小时。•用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。•方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。•高正确性：有阳性对照

5、片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性四检测样本的预处理TUNEL检测时样本的预处理是试验的关键所在，本说明书推荐的条件仅为普遍情况，用户需根据自已的样本材料及首次试验结果来调整各个条件（参照Page9},如处理时间、处理浓度等，来优化出适合自身样本的试验条件，从而做出客观的试验结果。1细胞样本的准备.PBS漂洗浸入封闭液中，茎（15-25"0）封闭IlOndnA（封0}液=珈HQ］溶于甲醇）aPBS漂洗-浸入通透液中，冰上（289）2ittijiPtwwiiitojixjoo溶千ojl皎书？趣讷，宀送入标记反应（详见Page8）a操作注意

6、事项：1.为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。2.固定好的样本可以在-20°C的70%乙醇中放貿30分钟〜一晚，以改善细胞的渗透性。3.使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脫落。4.进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。5.固定液、PBS、封闭液、通透液、染色缸需用户自备，请按上述方法配制。2石蜡组织切片的预处理*注意事项:蛋白酶K处理的使用浓度、处理时间及温度，都因组织的类型不同而有所不同，需要自已摸索优化上述条件，如有问题，请根据本说明书丹ge9的《常见问题的原

7、因及推荐解决方案》来调整条件。例如：如果凋亡细胞染色较弱时，可用高浓度的ProteinaseK（400ug/ml）处理5分钟。（本试剂盒的50XProteinaseK浓度为lmg/ml）。靈萱代才送」石蜡切片的预处理也可根据实际情况可采用下述三种替代方法之一，即蛋白酶K处理的步聚改用下述方法，其余步聚均相同：替代方法1：将脱蜡及水合好的切片浸入通透液中8-10min（通透液：0.l%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，需新鲜配妙替代方法2：将脱蜡及水合好的切片浸入胃蛋白酶或胰蛋白酶中8-10min（胃蛋白酶：0.25%-0.5%溶

8、于HC1PH2,胰蛋白酶0.25%-0.5%溶于0.01NHC1）替代方法3:将脱蜡及水合好的切片浸入含200ml0.1M的柠檬酸缓冲液PH6的塑料盒中，置于微波炉中350W（低档）处理5mi