竞争ELISA法测莱克多巴胺的残留

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1、竞争ELISA法测莱克多巴胺的残留7/18/20211酶联免疫吸附实验（ELISA），它是使抗原或抗体吸附于固相载体，使随后进行的抗原抗体反应均在载体表面进行，提高了灵敏度，即可检测抗原，也可检测抗体。实验方法包括间接法、夹心法及竞争法等。7/18/20212竞争ELISA：先将抗原包被在酶标板上，然后再加入竞争物（都能和一抗发生特异性结合的物质），然后加入一抗，这样竞争物抗原就会和包被抗原一同竞争性的和一抗结合，所以竞争物浓度越高，就会与一抗的结合几率越大。相反包被抗原就会越少的与一抗结合，这样在最后显色中OD值也就越低。注意：为了保证竞争物与包被抗原都有同样的机会

2、与一抗结合，不能先加一抗再加竞争物。7/18/20213莱克多巴胺是一种苯氧乙基青霉素，它属于β－促肾上腺素类兴奋剂（β－兴奋剂），这种兴奋剂具有促进肌肉生长和降低脂肪沉积的作用。人吃了残留莱克多巴胺的组织后会出现中毒症状，对患高血压、青光眼、糖尿病、前列腺肥大等疾病患者危害更大，严重的可能危及生命。7/18/20214通过竞争ELISA先得到一条线性关系比较好的标准曲线，得出关系方程。然后再将测得的样品值带入其方程从而求出样品中莱克多巴胺的含量。7/18/20215实验材料抗原：莱克多巴胺，抗体：莱克多巴胺单抗(1:10000)，梯度浓度标准竞争物（莱克多巴胺），底

3、物显色A液、B液，PBS洗涤液，HRP标记兔抗鼠二抗，终止液，96孔聚苯乙烯反应板、移液器、恒温箱（37℃）。包被液：0.01MpH9.6碳酸盐缓冲液洗涤液：0.015MpH7.4PBS+0.5%Twen20封闭液：洗涤液+3%BSA底物液：A：Tris.cl+H2O2B：TMB终止液：2MH2SO47/18/20217实验方法1、取两排已经包被好的板孔放入板架中2、按顺序加入竞争物各50µl。3、再取两个包被好的孔放入板架中，分别向两板孔中加入两种样品50µl。4、向所有板孔中加入稀释好的一抗50µl。5、放入37度温箱中孵育30min。6、甩掉板中的液体后，用PB

4、S-T洗液洗3遍，每次3分钟。7/18/20218实验方法7、向每个板孔中分别加入稀释好的二抗（1：8000）100µl，放入37度温箱孵育30min。8、甩掉板中液体，用PBS-T洗液洗5遍，每次3分钟。9、向每个板孔中分别加底物液A、B各1滴，避光反应10分钟。10、取出后向板孔中各加入50µl终至液（2M的H2SO4）11、用酶标仪读出数据，作出标准曲线，求出样品中的含量。7/18/20219获得标准曲线样品1样品2100A50B25C12.5D6.25E3.125F1.5625G0H12Ab1:10000竞争物7/18/202110Ab10000*Ag1006

5、.6438560.194505.6438560.313254.6438560.57012.53.6438560.9206.252.6438561.3943.1251.6438561.6861.56250.6438561.83101.895由标准曲线将光密度值换算成莱克多巴胺含量7/18/202111