临床细菌学检验技术

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1、第三章临床细菌学检验技术第一节细菌的形态学检查一、不染色标本二、染色标本第二节细菌分离培养和鉴定一、培养基的种类和选择二、分离培养三、生化反应四、鉴定第三节细菌的非培养检测方法（简介）一、免疫学检测二、分子生物学检测三、细菌毒素检测四、动物实验本章学习目标1、形态学检查（镜检）意义2、G染色法原理、方法、结果、意义和操作注意事项3、培养基概念、成分、分类与用途4、细菌分离方法及其用途5、常用生化反应原理、培养基、结果判定、应用6、细菌的非培养检测方法及其意义（适用于？）第一节细菌形态学检查是用普通光镜、相位

2、差显微镜、荧光显微镜、电镜，通过染色或不染色标本,观察细菌菌体的形态、大小、排列、特殊结构及染色反应等,是对细菌鉴定的一种手段。意义？**P45——通过细菌形态学检查（镜检）可以迅速了解标本中有无细菌及大致的菌量，而且根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别和分类，为进一步作生化反应、血清学鉴定提供依据；对少数细菌还可根据形态特征作出初步鉴定，对临床（早期诊断和治疗疾病）提供初步信息作为参考。简介：显微镜种类特点用途普通光学显微镜可见光直射,千倍染色细菌形态结构暗视野显微镜散射光,暗视野聚光器活菌

3、螺旋体动力相差显微镜相差板变光相与振幅活菌形态内部结构荧光显微镜高压汞灯紫外光紫蓝光抗原抗体助诊断荧光素标记细菌病毒电子显微镜电子流,强磁透镜表面与超微结构透射、扫描，数十万~一百万光学显微镜普通光学显微镜的分辨率为0.25um。一般细菌都大于0.25um，故可用普通光学显微镜观察。普通光学显微镜(lightmicroscope)显微镜放大法透射电镜扫描电镜电子显微镜与光学显微镜的基本区别光学显微镜电子显微镜分辨本领200nm/100nm接近0.1nm光源（波长）可见光400~700nm电子束0.01~0.

4、9nm紫外光200nm透镜玻璃透镜电磁透镜真空不要求1.33×10-5~1.33×10-3Pa成像原理利用样品对光的吸收利用样品对电子的散射形成明暗反差和颜色变化和透射形成明暗反差一．不染色标本检查法观察活菌的形态及运动情况；常用压滴法或悬滴法、毛细管法（厌氧菌）二．染色标本检查法（一）常用染料碱性、酸性、复合染料（二）常用染色方法1.单染色法:观察细菌的形态、大小、排列及某些特殊成分。2.复染色法(鉴别染色法):观察细菌的大小、形态、排列、特殊结构及染色性。细菌的形态检查法不染色标本检查法:观察细菌的大小

5、、形态、动力(主要)压滴法悬滴法染色标本检查法:毛细管法单染色法——观察细菌的形态、大小、排列革兰氏染色法复染色法(鉴别染色法)抗酸染色法观察细菌的大小、形态、排列、特殊结构染色法特殊结构及染色性荧光染色法细菌的检查方法常用复染色法A.革兰染色法:细菌常规染色法；染色结果紫（蓝）色为G+菌，红色为G—菌。B.抗酸染色法:常用于结核分枝杆菌等抗酸菌的检查；抗酸菌染成红色其他蓝色。C.特殊染色法:细菌结构如荚膜、芽胞、鞭毛以及细胞壁、异染颗粒等的染色。革兰染色法：结晶紫碘液95%乙醇复红抗酸染色：石炭酸复红3%

6、盐酸酒精碱性美兰其它特殊染色染色法1min1min1min脱色5min脱色革兰阳性革兰阴性抗酸染色阳性1min革兰氏染色法[原理]等电点学说、化学学说、细胞壁结构学说（1）细胞壁成分和结构的不同：G+菌肽聚糖多、G-菌肽聚糖少，但脂类含量高（2）等电点的不同:G+菌pI2~3、G-菌pI4~5（3）G+含核糖核酸镁盐[基本程序]1.制片:涂片（干燥）→固定2.染色:1min1min半min1min结晶紫染液--卢戈氏碘液--95％酒精--稀释石炭酸复红染液--吸干后镜检(初染)水洗(媒染)水洗(脱色)水洗(

7、复染)水洗革（格）兰染色法[影响因素]:1.培养基成分;2.培养条件;3.操作技术。操作技术方面指:涂片厚薄、干燥固定、脱色时间(此为关键步骤)[临床意义]鉴别细菌、选择药物参考、与致病性有关[革兰染色注意事项]1、涂片取菌（标本）过程严格无菌操作；涂片厚薄均匀，一般涂呈云雾状薄片，拇指大小；2、自然干燥为好，若烘干要缓慢，玻片不烫手为度；玻片标本必须经固定，一般火焰快速往返3次；3、玻片稍放凉方能加染料染色；染料加量适宜，要覆盖整个涂片区域并不外流；4、染色步骤的顺序不能调乱，时间严格把握，但脱色时间可依

8、涂片厚薄适当调整；5、冲水时连同染料随流水冲去，不宜先将染料倒去再冲；（这样可能有未溶的染料残渣积留在玻片）6、染色完毕要待玻片完全干燥才能滴油镜检。课堂检测1、使用普通光学显微镜，采用悬滴法可观察细菌的（）A鞭毛B芽孢C菌毛D动力E荚膜2、格兰染色液中稀释复红的作用是（）A固定B初染C媒染D脱色E复染3、不属于细菌形态学检查范畴的是（）A暗视野显微镜观察细菌动力B光镜观察细菌的排列方式C鞭毛染色观察细菌染色性D