液相色谱峰异常问题分析

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'液相色谱峰异常问题分析'
xuchunxiajs@163.com 第 1 页 共 7 页 HPLC 色谱峰异常问题分析 目录 1、色谱峰问题的来源.1 2、所有峰均为负峰.2 3、一个或几个峰是负峰.2 4、所有的峰都是宽峰.2 5、较早洗脱的峰呈宽峰.2 6、色谱峰峰形异常问题.2 (1) 、峰比预想的要小.2 (2) 、双峰或肩峰.3 (3) 、前伸峰.3 (4) 、平头峰.3 (5) 、拖尾峰.3 (6) 、分叉峰.3 (7) 、色谱图中未出峰.3 (8) 、色谱图中出峰比预想的少.4 (9) 、色谱图中出峰比预想的多(鬼峰)4 7、色谱峰保留时间异常问题分析.4 (1) 、保留时间飘忽不定(各次运行之间)4 (2) 、保留时间增加或减少(各次运行之间)4 (3) 、保留时间改变到一个新的恒定值.5 (4) 、保留时间重现性:pH 的影响.5 8、HPLC 系统压力问题分析 .5 (1) 、系统压力高.5 (2) 、压力低或没压力.5 (3) 、压力不稳 可能原因:6 9、HPLC 流路基线噪音问题分析6 (1) 、基线不稳定(不重复)6 (2) 、基线漂移.6 (3) 、基线周期性噪声.7 (4) 、基线非周期性噪声.7 (5) 、基线周期性波动.7 (6) 、基线有无规律的尖峰.7 1、色谱峰问题的来源、色谱峰问题的来源 ①、色谱柱毁坏 ②、溶解样品的溶剂不当 ③、第二种相互作用 ④、色谱柱过载——质量过载——体积过载 ⑤、其他柱外效应 xuchunxiajs@163.com 第 2 页 共 7 页 ⑥、管路连接 2、所有峰均为负峰、所有峰均为负峰 ——信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒 ——光学装置尚未达到平衡。 3、一个或几个峰是负峰、一个或几个峰是负峰 ——流动相吸收本底高 ——进样过程中进了空气 ——离子对分离中的系统峰 ——样品组分的吸收(RI 或 UV)低于流动相 4、所有的峰都是宽峰、所有的峰都是宽峰 ——系统未平衡或未达到化学平衡 ——溶样的溶剂比流动相强很多 ——色谱柱类型或尺寸不正确 ——色谱柱或保护柱被污染或降级 ——温度变化对色谱柱的影响 5、较早洗脱的峰呈宽峰、较早洗脱的峰呈宽峰 ——进样体积过大或样品浓度太高 ——进样器有问题,定量环(Loop)大小不合适 ——在线过滤器,保护柱,色谱柱或管路堵塞 ——管路问题:内径不对或切管不正确 ——管路连接问题:接头或锥箍不正确 ——检测器时间常数不正确 6、色谱峰峰形异常问题 (1) 、峰比预想的要小 ①、样品粘度过大 ②、进样器有问题或进样体积有误 xuchunxiajs@163.com 第 3 页 共 7 页 ③、检测器设置不正确,定量环(Loop)体积不正确 ④、检测器输出未置零 ⑤、用了不正确的检测器输出信号 ⑥、检测池被污染 ⑦、检测器的灯可能有问题 (2) 、双峰或肩峰 ①、进样量或样品浓度过大 ②、保护柱或色谱柱进口堵塞 ③、保护柱或色谱柱污染或失效 (3) 、前伸峰 ①、进样量或样品浓度过大 ②、溶液的溶剂相对于流动相太强 ③、保护柱或色谱柱污染或失效 (4) 、平头峰 ①、检测器设置不正确 ②、进样体积过大或样品浓度太高 (5) 、拖尾峰 ①、保护柱或色谱柱问题:污染或失效 ②、进样问题 ③、检测器时间常数设置不正确 (6) 、分叉峰 ①、保护柱或分析柱污染 ②、样品溶剂不溶于流动相 (7) 、色谱图中未出峰 ①、进样问题:未进样或样品分解 ②、流动相问题:泵未输液或流动相不正确 ③、检测器设置不正确,或检测器有问题 xuchunxiajs@163.com 第 4 页 共 7 页 (8) 、色谱图中出峰比预想的少 ①、样品分解 ②、色谱柱柱效丧失 ③、用错流动相 ④、梯度洗脱时平衡不足(例如,过早将手动进样器扳至 Load 位置) (9) 、色谱图中出峰比预想的多(鬼峰) ①、样品分解或制样时导入了杂质 ②、流动相被污染,或用错流动相 ③、流动相中含有稳定剂或稳定剂发生变化 ④、前次进样的后流出物(某些 Rt 值特别大的组分) ⑤、进样器被污染,洗针系统出问题或注射器脏 ⑥、未充分平衡进样器 Loop 管 ⑦、保护柱脏,色谱柱被污染,分辨率下降 或 ①、进样阀残余峰 ②、样品中未知物 ③、柱未平衡 ④、水污染 ⑤、三氟乙酸氧化 7、色谱峰保留时间异常问题分析 (1) 、保留时间飘忽不定(各次运行之间) ①、系统不稳定或未达化学平衡 ②、泵压力不稳(泵头里有气泡) ③、进样体积过大或样品浓度过大 ④、温度波动 ⑤、流动相混合不均匀 ⑥、色谱柱被污染 (2) 、保留时间增加或减少(各次运行之间) ①、系统不稳定或化学平衡不足 ②、泵流速变化 ③、温度变化 ④、色谱柱污染,柱效下降 ⑤、流动相被污染 ⑥、溶剂入口过滤器堵或管路堵塞 xuchunxiajs@163.com 第 5 页 共 7 页 ⑦、系统渗漏 (3) 、保留时间改变到一个新的恒定值 ①、流动相不正确或其组成不正确 ②、泵流速变化 ③、实际输液的流速不正确(泵失灵或故障) ④、环境温度变化;柱温不正确 ⑤、色谱柱尺寸或类型不正确 ⑥、色谱柱被污染 ⑦、流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化 ⑧、输液系统的梯度滞后体积不正确 (4) 、保留时间重现性:pH 的影响 化学因素 ——中性物质:无影响 ——酸性物质:pH 增加,保留降低 ——碱性物质:pH 增加,保留增加 ——0.1 pH 的变化会导致高达 10%的保留时间变化。(pH 在 pKa +/- 1 之 内保留时间变化最大) 8、HPLC 系统压力问题分析 ((1) 、) 、系统压力高 可能的原因: ①、温度太低 ②、流速太高 ③、流动相粘度大 ④、管路堵塞 ⑤、仪器或色谱柱堵塞 ⑥、压力传感器问题 (2) 、压力低或没压力 可能原因: ——温度太高;流速太低 ——泵关闭或保险丝断了 ——泵未输送流动相 ——系统内有渗漏处 xuchunxiajs@163.com 第 6 页 共 7 页 ——所用溶剂不正确 ——自动进样器在 Purge 时卡住 ——储液瓶中无溶剂 ——低压限设置不当 ——泵未正确排气 ——溶剂入口过滤头堵 ——入口管路中有空气 ——泵失效 (3) 、压力不稳 可能原因可能原因: ①、压力传感器问题 ②、泵排气不充分 ③、泵失效 ④、流动相未正确脱气 ⑤、所用溶剂不混溶或易挥发 9、HPLC 流路基线噪音问题分析 (1) 、基线不稳定(不重复) ①、检测池中有大的气泡 ②、流路中有小气泡流过 ③、系统未稳定或未达到化学平衡 ④、流动相被污染 ⑤、检测器流动池漏 ⑥、色谱柱污染 (2) 、基线漂移 ①、色谱柱有其他组份被洗脱出————冲洗, 直至基线稳定 ②、 溶剂发生变化 (如溶入气体或溶剂挥发)————氦气或脱气机脱气, 溶剂瓶 避光,密封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压) ③、系统有漏液之处————检漏并处理 ④、环境温度影响 (尤其对示差,电导,电化学检测)————室温,柱温,检测池温 度控制 ⑤、环境湿度影响————对光检测器有较大影响 ⑥、反压变化————溶剂和样品过滤,注意黏度过大的样品 xuchunxiajs@163.com 第 7 页 共 7 页 (3) 、基线周期性噪声 ①、
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