全自动生化分析仪的常用检测方法PPT课件

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1、生化分析仪的常用检测方法董苹2010-8内容一概述二基本原理终点法三检测方法固定时间法连续监测法功能特点特点：自动化——机械化的仪器设备模仿代替手工操作优点：提高了工作效率减少了主观误差灵敏准确快速标准化分类管道连续流动式按结构原理分分立式——常用离心式干片式——急诊常用小型按测定速度分中型大型超大型（模块式）按自动化程度分半自动全自动主要构成加样系统（样品转盘试剂仓取样装置）比色系统（光源比色杯单色器检测器）供排水系统数据处理系统内容一概述二基本原理终点法三检测方法固定时间法连续监测法光吸收曲线溶液对不同波长光的吸收程度，通常用光吸收曲线来描述。讨论不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相

2、似λmax不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则不同。不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度A不同，在λmax处吸光度A的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。在分光光度法中,以______为纵坐标,以____为横坐标作图可得光吸收曲线。浓度不同的同种溶液,在该种曲线中其最大吸收波长_______，相应的吸光度大小则_______，同一波长下摩尔吸数。波长不同相同吸光度相同Lamber-Beer定律：吸收光谱法基本定律描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系Lamber定律：A∝lBeer定律：A∝C入射光强度I0透射光强度I物体截面为S厚度为lLambe

3、rt-Beer（朗伯-比尔）定律当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比A=kcbA---吸光度k---吸光系数c---溶液浓度b---液层厚度吸光度透光度的负对数表示物质对光的吸收程度A=-lgT=lg1/T=lgI0/ItT---透光度I0--入射光强度It--透射光强度T=It/I0吸光系数定义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时测得的吸光度。K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。吸光系数三种表现形式：摩尔吸光系数ε吸光系数a百分吸光系数E1%1c

4、mLambert-Beer（朗伯-比尔）定律郎伯-比尔定律表明：当液层厚度固定时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。即：A/C=const故：只要测出某种溶液的吸光度，将它与已知浓度的标准溶液吸光度进行比较，就可以算出该溶液的浓度。讨论：1.Lamber-Beer定律的适用条件（前提）:入射光为单色光溶液是均匀，无散射溶液2.该定律适用于固体、液体和气体样品3.在同一波长下，各组分吸光度具有加和性如果溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质,则测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和，即：A（a+b+c）＝Aa＋Ab＋Ac应用：多组分测定偏离Beer定律的因素依据Beer定律,

5、A与C关系应为经过原点的直线偏离Beer定律的主要因素表现为以下两个方面：（一）光学因素（二）化学因素（一）光学因素1．非单色光的影响：Beer定律应用的重前提—入射光为单色光照射物质的光经单色器分光后并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度和棱镜或光栅的分辨率决定为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度这就使分离出来的光具一定的谱带宽度讨论入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状E1＝E2A=E1C·LE1≠E2A与C不成线性关系，偏离Beer定律（E2-E1)↑A与C偏离线性关系越严重结论：●选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑）●选λmax作为测定波长（一）光学因素2.

6、杂散光的影响杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远。杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值。（一）光学因素3．反射光和散色光的影响：反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光直接对T产生影响。散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形注：一般可用空白对比校正消除4．非平行光的影响：使光程↑，A↑，吸收光谱变形（二）化学因素溶液中的溶质可因c的改变而有离解、缔合、配位以及与溶剂间的作用等原因而发生偏离L-B定律的现象。例：在水溶液中，Cr(Ⅵ)的两种离子存在如下平衡Cr2O42-+H2O⇌2CrO42-+2H+定量分析方法(1)标准

7、曲线法(2)标准溶液对比法（外标一点法）(3)吸光系数法标准曲线法——最经典方法前提：固定仪器和固定条件过程：配置标准溶液系列分别测定A得C~A曲线样品测定A样查得C样标准曲线法标准溶液对比法在相同的条件下，配制浓度为cs的标准溶液和浓度为cx的试样溶液，在最大吸收波长处，分别测定二者的吸光度值为As、Ax，依据朗伯-比尔定律得:As=KbcsAx=Kbcx则:cx=cs*Ax/As标准溶液对比法吸光系数法吸光系数法又称