噬菌体受体结合蛋白的筛选及对其宿主大肠杆菌的作用研究

《噬菌体受体结合蛋白的筛选及对其宿主大肠杆菌的作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：S852.69单位代码：10183研究生学号：2015852026密级：公开吉林大学硕士学位论文（学术学位）噬菌体受体结合蛋白的筛选及对其宿主大肠杆菌的作用研究ScreeningandResearchingofPhageReceptor-BindingProteinagainstitshoststrainEscherichiacoli作者姓名：于领专业：预防兽医学研究方向：微生物学与免疫学指导教师：雷连成教授培养单位：动物医学学院2018年6月噬菌体受体结合蛋白的筛选及对其宿主大肠杆菌的作用研究ScreeningandResearchingofPhage

2、Receptor-BindingProteinagainstitshoststrainEscherichiacoli作者姓名：于领专业名称：预防兽医学指导教师：雷连成教授学位类别：农学硕士论文答辩日期：2018年月日授予学位日期：2018年月日答辩委员会组成：姓名职称工作单位主席周锐教授华中农业大学委员范红结教授南京农业大学朱国强教授扬州大学刘思国研究员中国农业科学院哈尔滨兽医研究所钱爱东教授吉林农业大学未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改

3、编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士（或硕士）学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研宂工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果ｄ寸本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：％４年（月（／日本研究由“国家重点基础研究发展计划”项目资助（No.2013CB127205）T

4、hestudywasfundedbytheNationalKeyBasicResearchProgramofChina(No.2013CB127205).中文摘要噬菌体受体结合蛋白的筛选及对其宿主大肠杆菌的作用研究大肠杆菌（Escherichiacoli，E.coli），常见于医源性感染的条件致病菌，可引发膀胱炎、肾盂肾炎、肠炎、肺炎、脑膜炎、菌血症等多种局限性及全身性的感染性疾病。近年来，随着大肠杆菌耐药性的不断加剧与蔓延，可用抗生素濒临枯竭。因此，研发新的抗生素替代药物及抗菌生物制剂变得迫切而必要。噬菌体，作为细菌的“捕食者”，是自然界中数量最多、分布最广的

5、群体。自2011年第一届噬菌体大会召开以来，科学家们在应用噬菌体治疗细菌尤其是多重耐药菌感染方面取得了丰硕的研究成果，应对日渐严重的细菌耐药，噬菌体或将大有可为。本实验室前期分离得到的一株大肠杆菌噬菌体（vB_EcoM_ep3）对多重耐药（β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗生素）大肠杆菌O78-6具有更加明显的裂解效果（与敏感菌株相比），但其作用机制尚不完全清楚。本研究旨在筛选噬菌体受体结合蛋白并对其结合作用进行研究，为解析噬菌体及其宿主菌相互作用机制提供基础。GeneBank上对大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_ep3（geneID：KM360178.1）的全基

6、因注释结果显示，vB_EcoM_ep3共有56个开放阅读框（ORFs）。为了能够在众多噬菌体蛋白中行之有效地找到能与宿主菌相互作用的蛋白，我们首先建立了随机表达噬菌体蛋白的大肠杆菌文库，并对所建文库的准确性及分子多样性进行了检测。以大肠杆菌O78-6为靶分子对构建的噬菌体蛋白文库进行筛选及初步鉴定，筛得的阳性克隆经DNA测序确定其基因序列，最终经序列比对分析，得到可能与宿主菌互作的两种噬菌体受体结合蛋白：噬菌体衣壳蛋白和噬菌体尾丝蛋白。其中，尾丝蛋白作为最主要的RBP，在噬菌体感染阶段发挥着至关重要的作用。为了确证噬菌体vB_EcoM_ep3尾丝蛋白Dpo41的

7、功能，构建了该蛋白的原核表达载体并对其进行了纯化。将Dpo41作为免疫原免疫小鼠以制备高免血清，应用硫酸铵沉淀法分离和纯化IgG。Westernblot检测证实，Dpo41多克隆抗I体的纯度及特异性良好。Dpo41抗体添加实验显示，Dpo41多克隆抗体能有效封闭尾丝蛋白Dpo41，从而显著降低噬菌体vB_EcoM_ep3对宿主菌O78-6的吸附效率及裂解效率。本研究初步阐明：尾丝蛋白在噬菌体感染细菌的过程中，通过高效吸附到宿主菌表面进而促进噬菌体的裂解。尾丝蛋白的关键作用位点及其如何在噬菌体与宿主菌互作过程中发挥作用还有待进一步论证。关键词：多重耐药大肠杆菌，大

8、肠杆菌噬菌体，尾丝蛋白，