盐酸小檗碱抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素及其诱导的氧化损伤

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1、分类号：TS201单位代码：10183研究生学号：2016464002密级：公开吉林大学硕士学位论文（专业学位）盐酸小檗碱抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素及其诱导的氧化损伤BerberineInhibitsStaphylococcusaureusα-hemolysinandtheoxidativedamageInducedbyα-hemolysin作者姓名：车美垚类别：工程硕士领域（方向）：食品安全与卫生检验指导教师：郭娜副教授培养单位：食品科学与工程学院2018年6月盐酸小檗碱抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素及其诱导的氧化损伤BerberineI

2、nhibitsStaphylococcusaureusα-hemolysinandtheoxidativedamageInducedbyα-hemolysin作者姓名：车美垚领域（方向）：食品安全与卫生检验指导教师：郭娜副教授类别：工程硕士答辩日期：2018年5月28日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论

3、文原创性声明？．本人郑重声明所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年６月＂日中文摘要盐酸小檗碱抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素及其诱导的氧化损伤本研究隶属于国家自然科学基金面上项目-《茶树油对SarA介导的金黄色葡萄球菌生物被膜形成的干预机制研究》（31271951）

4、众所周知，对于人类危害十分严重的食源性致病菌之一的金黄色葡萄球菌（金葡菌），不仅能够引发人们食物中毒，甚至还能诱发多种致死性感染疾病，给人们生命安全带来了严重威胁。据研究表明，金葡菌致病性最主要原因是其能够分泌多种毒力蛋白，例如α-溶血素，肠毒素A(SEA)和肠毒素B(SEB)。其中α-溶血素是最重要的毒力因子。盐酸小檗碱作为一种化学结构十分明确的天然化合物，是从罗汉松中提取出来的一类有着极强生物活性的异喹啉类生物碱。据之前报道表明，盐酸小檗碱可以控制住某些病原体的扩散。但目前关于盐酸小檗碱对金葡菌α-溶血素，SEA和SEB的抑制作用效果并

5、无文献报道。本论文在查阅国内外文献的基础上，针对盐酸小檗碱对于金葡菌抑菌机制和对由α-溶血素引起氧化损伤模型影响，开展以下三方面研究工作：（1）研究了盐酸小檗碱对金葡菌活性研究以及盐酸小檗碱对金葡菌细胞膜的抑制作用。实验结果表明，盐酸小檗碱对金葡菌MIC是128μg/mL。通过测定了盐酸小檗碱不同浓度、不同作用时间下金葡菌的生长情况，反映了盐酸小檗碱对金葡菌的作用情况。通过纸片扩散法考察了盐酸小檗碱对金葡菌生长的抑制效果，表明在128μg时抑制作用最强且呈剂量依赖性。另外，通过浓度为0μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/m

6、L的盐酸小檗碱对金葡菌菌悬液紫外吸收值的测定以及内膜通透性实验，表明盐酸小檗碱为对金葡菌β-半乳糖苷酶的产生具有抑制作用，在64μg/mL时细胞膜破坏程度最高。扫描电镜实验观察到盐酸小檗碱以不同时间作用于细菌时，细胞发生扭曲变形。随着时间延长为3h时，细胞表面凹凸不平甚至肿胀，使营养物质和遗传物质泄露。（2）研究盐酸小檗碱对金葡菌分泌α-溶血素、SEA和SEB这三种毒力因子的作用机制。溶血试验表明，相比于空白组，当加入浓度为8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL盐酸小檗碱作用时，溶血比例分别降低为81.1%、68.01

7、%、I36.61%、8.34%，同时盐酸小檗碱对金葡菌上清液溶血抑制呈明显剂量依赖性。蛋白免疫印迹法表明亚抑菌浓度下盐酸小檗碱能够有效抑制α-溶血素，SEA和SEB分泌，并具有剂量依赖性。ELISA法测定出在不同浓度盐酸小檗碱作用下，肝细胞L02中的细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β释放量逐渐减少。（3）研究了盐酸小檗碱对α-溶血素诱导肝细胞L02的氧化损伤的抑制作用。首先，MTT法检测对照组、α-溶血素组、低剂量盐酸小檗碱+α-溶血素组、中剂量盐酸小檗碱+α-溶血素组、高剂量盐酸小檗碱+α-溶血素组细胞增值活性的影响。接着测定了MD

8、A以及抗氧化酶系SOD、GSH-Px的活力情况，研究表明盐酸小檗碱能够抑制α-溶血素诱导肝细胞L02所引起的氧化损伤，且抑制作用呈剂量依赖性。最后进行流式细胞术检测ROS的产生以