医学论文-抗精液抗体对精子线粒体功能的影响

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1、医学论文-抗精液抗体对精子线粒体功能的影响                作者：陈德宇，刘丽敏，谢庆东，黄天华【摘要】 目的：探讨抗精液抗体与线粒体功能之间的关系。方法：制备抗精液抗血清，用其处理精子后，做精子活力分析、精子凝集实验、精子线粒体功能分析、体外受精及精卵融合实验，分别探讨抗精液抗体在体外制动精子的机制以及抗精液抗体与线粒体功能之间的关系。结果：抗精液抗体能够完全凝集和制动精子；流式细胞仪检测结果表明实验组精子线粒体平均荧光强度为91.45±21.02，对照组358.7±137.81(P<0.01)；体外受精实验中实验组未见受精卵，对照组有

2、卵子受精。结论：抗精液抗体在体外能够完全凝集和制动精子，可以阻止精卵融合。抗精液抗体可以介导精子的凋亡。【关键词】 抗精液抗体；体外杀精剂；精子凝集；体外受精；线粒体；凋亡　　［Abstract］Objective:Tostudytherelationofanti-semenantibodyandthefunctionofmitochondrion.Methods:Theanti-semenantibodywaspreparedandthespermmotilityrate,spermagglutination,spermmitochondrialfu

3、nctionanalysisandinvitrofertilizationwereanalyzed.Results:Anti-semenantibodycouldagglutinateandimmobilespermcompletely.Theaveragespermmitochondrionfluorescenceintensitywas91.45±21.02intheexperimentgroupand358.79±137.81inthecontrolgroup,therateoffertilizationinvitrofertilizationw

4、asdifferentbetweentwogroups.Conclusion:Anti-semenantibodycanagglutinateandimmobilesperminvitro,anditcanaffectthefunctionofmitochondrion.　　［KeyWords］anti-spermantibody；spermicide；spermagglutination;invitrofertilization;mitochondrion；apoptosis   细胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自行结束生命的

5、过程［1］。细胞最后裂解成若干凋亡小体，被其他细胞吞噬［2］。线粒体是细胞内产生能量的重要细胞器，死亡受体介导的信号、生长因子抑制剂、抗癌药物等可使线粒体的功能损伤，诱导细胞凋亡［3～5］。有文献报道抗精子抗体与不孕不育之间的关系［6～8］，但抗精子抗体与线粒体功能之间的相关性未见有关报道。本研究制备抗精液抗体，旨在探讨抗精液抗体在体外的抑精机制，分析抗精液抗体与线粒体功能之间的关系。　　1 材料与方法　　1.1 材料   新西兰大白兔(上海实验动物有限公司，中国)8只，体质量2～3kg。完全福氏佐剂和不完全福氏佐剂(上海生物工程有限公司，中国)，Br

6、adford试剂盒、羊抗兔IgG-HRP(博士德生物有限公司，中国)，ProteoExtract天然膜蛋白提取试剂(Merck公司，德国)，DePsipherTM试剂盒(America公司，美国)，其它生物化学试剂为本室储备品。　　1.2 方法　　1.2.1 精液获取 　　10份正常精液来自汕头大学医学院生殖医学研究中心，志愿者年龄23～30岁，平均26.4岁。手淫法收集精液标本，37℃液化2h，上游法获取活力高的精子，用WLJY-9000伟力彩色精子质量分析系统(北京伟力新世纪科技发展有限公司，中国)测定精子活力及精子密度。　　1.2.2 免疫 　　

7、将1mL上述精液与1mL完全福氏佐剂充分混匀，于新西兰兔皮下注射，每点注射100μL，免疫1周后，皮下注射精液与不完全完全福氏佐剂的混合液，免疫1次/周，免疫4周，心脏采血，常规法分离血清。Bradford法测定血清浓度。　　1.2.3 效价测定 　　ELISA法测定效价。采用ProteoExtract天然膜蛋白提取试剂盒，根据其操作说明书提取精子膜蛋白。将精子抗原按1∶800稀释包被酶标反应板，4℃过夜；弃上清，PBST(含体积分数0.1%的Tween的0.01mol/L磷酸盐缓冲液)洗板4次，每次3min；用质量分数5%的脱脂奶粉封闭微孔板，每孔2

8、00μL，37℃2h；PBST洗板4次，每次3min；取2倍比例稀释的血清每孔100μL，37