高效液相色谱仪基本原理、应用及常见故障

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1、高效液相色谱仪基本原理、应用及常见故障（概要）1高效液相色谱仪的系统组成、工作原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。2高效液相色谱仪的应用高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，

2、不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合,HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测足性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到牛物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与

3、结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农药和多核芳坯等；液相色谱-红外光谱连用也发展很快，如在环境污染分析测定水中的坯类，海水中的不挥发坯类，使环境污染分析得到新的发展。3高效液相色谱仪常见故障处理LC-10AT高效液相色谱仪是日本岛津公司1996年的产品，检测器为可变波长紫外检测器，色谱柱为岛津公司的ODS-C18,大连依利特的ODS-C18。八年的日常工作中遇到了几种故障，如故障1经咨询岛津公司的工程师后，得以解决;故障2、故障5是频繁碰到的问题等，特作总结如下:故障1流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压

4、阀，打开purge键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相,无论打开purge键几次，都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸鞍等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的牛长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液屮，超声清洗儿分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12〜36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开Purge键，清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器

5、内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1・0〜3.Oml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。故障2柱压高原因（1）缓冲液盐分如（乙酸技等）沉积于柱内；（2）样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40〜50°C的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲

6、洗时间的长短由样品污染的情况而定），再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。故障3既无压力指示，又无液体流过。原因（1）泵密封垫圈磨损；（2）大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况，更换密圭寸垫圈；对于第二种情况，在泵作用的同吋，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。故障4压力波动大，流量不稳定.原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的

7、烧杯用超声波清洗.故障5出峰不佳，峰分叉。原因（1）色谱柱被污染；（2）柱头填料塌陷。处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+界丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分（污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦

8、净柱外壁的填料，拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。故障6峰面积重复性不佳。原因