设计性实验报告植物可溶性蛋白质和糖含量的测定

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1、设计性实验报告题目植物可溶性蛋白质和糖含量的测定课程名称：基础生物化学实验实验学期：2011至2012学年第一学期植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定摘要本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。结果表明：生菜的蛋白质含量为5.88（mg/g），糖含量为0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为0.2926（mg/g），糖含量为0.2126g/100g。即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。关键词可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝G-250染色法，

2、蒽酮法，含量测定1、材料与方法1.1蛋白质含量测定标准蛋白质溶液、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等1.2糖含量测定200ug/ml标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架2、实验步骤蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）2.1标准曲线的绘制取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标

3、准曲线。试剂管号012345标准蛋白质（ml）00.200.400.600.801.00蒸馏水量（ml）1.000.800.600.400.200蛋白质含量（ug）0204060801002.2样品测定2.2.1样品提取分别秤取生菜、苹果鲜样0.25～0.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min离心10min，上清液备用。2.2.2吸取样品提取液1.0ml（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。糖含量测定2.3.葡萄

4、糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。2.4.可溶性糖的提取称取1克生菜叶和苹果，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后3000

5、r/min离心10min，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。2.5.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。3、结果记录及处理3.1（蛋白质）管号012345生菜苹果蛋白质含量（ug

6、、x）020406080100Y1Y2吸光度（nm、y）00.1650.2560.3850.4860.5970.4990.183散点图表示：通过计算上表可用y=0.00547x+0.0496表示样品中蛋白质的含量=（C*Vt/（Vs*Wf*1000）（mg/g）式中：C——查标准曲线值，ugVt——提取液总体积，mlWf——样品鲜重，gVs——测量时加样量，ml所以生菜中蛋白质的含量=5.88（mg/g）苹果中蛋白质的含量=0.2926（mg/g）3.2（糖）管号123456生菜苹果葡萄糖含量（ug、x）04080120160200Y1Y

7、2吸光度（nm、y）00.01980.2870.4790.5890.7410.7390.780散点图表示通过计算上表可用y=0.00347x+0.0424表示样品中糖含量（g/100g鲜重）{（计算所得糖含量（ug）*稀释倍数）/（样品重（g）*106）}*100则生菜样品中糖含量=0.0739g/100g苹果样品中糖含量=0.2126g/100g4、结果讨论结果表示生菜的蛋白质含量为5.88（mg/g），糖含量为0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为0.2926（mg/g），糖含量为0.2126g/100g。即说明：生菜中蛋白质含

8、量高于苹果，但苹果中的糖含量高于生菜。5、收获体会生物学是一门以实验为基础的自然科学，现代生物科学的发展尤其依赖科学实验。在生物教学中，实验、学习和观察等实践环节对我们掌握生物学知识、科学方法