微生物学检验基本技术1

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1、佥基本技术1》基本技术2及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术己深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法己在临£zWo医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生彳衩寸感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。：物形态学检查2查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。渣•微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜

2、才乍1下几种。显微镜宅光或灯光为光源，其波长约为0.4

3、jm°显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2pm，而肉眼可见的最小形象为0・2mm。故用油（浸川的微粒放大成肉眼可见的0.2mmo普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。微镜:染色微生物形态和运动。在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后E野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。镜U用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于扌I而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部

4、结构和运动方式等。镜亍普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外7滤光片和吸收滤光片二种。用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光骼外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。本法适丿7光抗体结合的细菌的检测或鉴定。镜j光源，波氏与可见光相比差几万倍，大大提高了分辨力，并用磁性电圈作为光学放大系统，放大倍数可达数万倍或几十万倍，常用于病卡I察。E本检查•般可用于观察细菌形态、动力及运动情况。细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。冇*E毛的细菌则呈不规则

5、布朗运动。梅毒苍白密螺旋体、钩端螺旋体、弯曲杆菌等的活菌各有特征鲜明的形态和运动方式，具有诊断意义。?F法和毛细管法等。「的凹孔四周涂上凡士林，用接种环取一环菌悬液放在盖玻片中央，再将凹玻片的凹孔对准盖玻片屮央的液滴并盖上，然后迅速翻转，轻丿曲勺凡士林粘紧封闭后置高倍镜下（或暗视野）观察。-环菌悬液置于洁净玻片的中央，在菌悬液上轻轻盖上-盖玻片，注意避免产生气泡并防止菌悬液外溢，静止数秒钟后置高倍镜下明视野总菌动力的检查。通常选用60-70mm长。0・5~l・0mm孔径的毛细管虹吸厌养菌悬液后，用火焰将毛细管两端熔封。并用塑胶纸将毛纟M咅镜下暗视野观察。:检查》色后，山

6、于细菌与周围环境间在颜色上形成鲜明対比，故在普通光学显微镜下可清魁地观察到细菌的形态特征（如细菌的大小、形状、扌（如荚膜、鞭毛、芽孑包等），并可根据染色反应性对细菌加以分类鉴定。2色的一般程序•般程序是：涂片（干燥）一固定一染色（媒染）一（脱色）一（复染）。9、排泄物、穿刺液和液体培养物，直接在载玻片上作薄膜涂片；尸检或感染动物组织，病变局部涂抹采样的棉拭子直接涂片。固体培养?先用接种环取一环生理盐水置载玻片屮央，再用无菌接种环取少量的培养物在生理盐水中磨匀，涂布成lcm2大小的涂面，置室温下自攻H菌，凝固细菌蛋白及结构，便于染色；促使细菌粘附在载玻片上，避免在水洗过程

7、中被水冲掉；改变细菌对染料的通透性，有利于菌细£〔焰加热固定，将己干燥的涂片在火焰屮迅速通过3次，以手背皮肤接触玻片不烫为佳。J不同，选择不同的染色方法进行染色。染色时滴加染液，以复盖标本为度。丄和被染物的亲和力，使染料固定于被染物及能引起细胞膜通透性改变的物质，称媒染剂。常用的有明矶、糅酸、金属盐和碘等，也有用戈「用于初染与复染之间，也可用于固定之后或含于固定液、染色中。1的被染物脱去颜色的化学试剂称为脱色剂。常用乙醇、丙酮等作为脱色剂。脱色剂可以查出细菌与染料结合的稳定程度，作为鉴别染色.J细菌或其结构常以复染液作复染以便于观察。复染液与初染液的颜色不同而成一鲜明对

8、比。复染不宜太强，以免掩盖初染的颜色。莒色法（染液配方见第8章）卜染色。山于大多数细菌胞浆内含有酸性物质，可与碱性染料结合，故常用吕氏美蓝、结品紫和稀释石碳酸复红等染液。此法可观察细菌f扌显示细菌的结构与染色特性。P以上不同染料可将细菌染成不同的颜色，除可观察细菌的大小、形态与排列外，还反应出细菌染色特性，具有鉴别细菌种类的价值。常/2色法。色：①细菌涂片经火焰固定，加结晶紫染液染1min,淸水冲去染液。②加碘液媒染lmin,水洗，甩干。③用95%乙醇脱色，轻轻摇z。止，水洗，甩干。④加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染，约30s,水洗