Agilent-1200高效液相色谱仪操作规程

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1、Agilent1200高效液相色谱仪（四原泵）操作规程1.目的建立高效液相色谱仪（四原泵）使用维护保养标准操作规程，确保测暈结果准确、可靠。2.适用范围本SOP适用于Agilent1200高效液相色谱仪（四原泵）的使用。3.责任者化验员应严格遵照该操作规程，管理方负责监督本规程的实施。4.定义无5.规程5」准备在开机Z前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相、供试品及对照品。流动相装入溶剂储液瓶，确认吸滤头已置于液而以下，供试品溶液和对照品溶液均用0.45屮n的膜过滤。5.2开机5.2.1打开电脑；5.2.2打开1200各模块电源；5.2.3等待各模块就绪后，双击桌面上的工

2、作站图标，进入化学工作站；5.2.4旋开泵上的purge阀（逆时针转动，旋松即可，不要转动太多。），将流速设置为5.0ml/min,将准备排气的管道的流量设置为100%（如：流路A比例则是100%-B-C-D）,在工作站中打开泵，则开始排除管路中的气泡（吋间约为5min）；其他通道同理操作。5.2.5排气完成后，关闭purge阀（顺时针旋转，旋紧即可，不必旋的太紧。）。5.2.6连接色谱柱，用适宜的流动相冲洗色谱柱。如果使用有盐的流动相，要先用80%的水过渡。5.2.7更换方法规定的流动相。冲洗约30分钟。5.3设置方法5.3.1设置新方法531.1（口动进样器参数设定：单击工

3、作站中“进样针”图标，选择“设置进样器”（一般选择洗针进样，清洗瓶位置一般为100位），单击“确定”按钮即可;5.3.1.2泵参数设定（四元泵）：单击工作站中“泵”图标，选择“设置泵”。①在“流速”处输入流速（如l.Oml/min）；②在“停止时间”处设定所需采集时间；③在时间表屮插入时间列表，编辑梯度；④在压力限处可设定最大耐高压，以保护色谱柱，单击“确定”按钮即可；5.3.1.3检测器参数的设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如280nm,在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如＞0.1min（2s）o5.3.1.4点击“方法”菜单，选

4、小“保存方法”，输入方法名，保存至所需文件夹项下，单击“确定雹5.3.1调用已有方法点击“文件"下拉菜单，选择“方法”，然后根据方法保存的路径，打开所需要的方法。5.4样晶采集5.4.1单针进样由“运行控制”进入“样品信息”，设定“操作者姓名”，“样品数据文件名”等，点击“单次进样”图标开始采集数据；5.4.2运行序列选屮“序列,，菜单，选择“新建序列”，在序列参数屮输入“样品信息”，在序列表中输入“样品瓶位置”、“进样次数/瓶”、“方法名称”、“数据文件”、“进样量,，等，等仪器就绪，基线平稳，从“方法”菜单中选择“运行方法”进样。543数据处理5.4.3.1由主菜单上的“视

5、图”选择“数据分析”（或单击工作站左下方“数据分析”）,进入数据处理界而；543.2由主菜单上的“文件”进入“调用信号”（或单击“调用数据文件的信号和光谱”、“调用数据文件的信号和光谱并与当前的信号重叠”图标），调出要分析的数据文件色谱图；543.3由主菜单上的“图形"进入“信号选项''（或点击“指定报告讣算及打印格式“图标），调整图谱坐标；(1)点击“自定义量程”，在“时间范围”中输入横坐标(时间)女口：0到10；(2)在“响应范围”中输入纵坐标(响应值)如：・5到50；(3)在“量程”框中，调用“全部使用相同量程"；(4)点击确定即可；543.4由主菜单上的“积分”(或点击

6、“编辑/设置积分事件”图标)进入积分事件,设置、修改积分参数；(1)在“斜率灵敏度”后输入“斜率值S(2)在“峰宽”后,输入“最小峰宽S(3)在“最小峰面秋，后，输入“最小峰面积值"；(4)在“最小峰高”后，输入“最小峰高值"；(5)点击左上方带钩的图标确认。5.435由主菜单上的“报告”进入“设定报告”，设置报告参数；(1)在“定量结果"栏中，选择计算(面积百分比、外标法、内标法等)；(2)在“输出报告”栏中,选择“打印机打印”或者“屏幕打印S(3)点击确定并退出。543.6由主菜单上的“报告”进入打印报告，打印报告。5.5关机5.5.1实验完毕，关闭宛灯，用合适的冲洗液冲洗

7、色谱柱。5.5.2含盐的管路要用10%或20%的甲醇以l.Oml/min的流速冲洗40min(4.6x250mm的色谱柱)，再用70%以上的甲醇，以1.Oml/min的流速冲洗色谱柱3()min以上。5.5.3管路要用含有有机相的水溶液或纯有机相保存。5.5.4关泵、关闭化学工作站及其它窗口，关闭计算机。5.5.5关闭仪器电源。5.6注意事项5.6.1流动相必须过滤和超声后才能使用。5.6.2为节约宛灯的寿命，冲洗管路及色谱柱时关闭宛灯，氮灯不能频繁开关，要I'可隔lOmin左右；2小时内需