多功能纳米粒子对非小细胞肺癌靶向诊疗一体化的实验研究

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1、暨南大学博士学位论文题名(中英文对照)：多功能纳米粒子对非小细胞肺癌靶向诊疗一体化的实验研究Theexperimentalstudyonmulti-functionalnanoparticlefornon-smallcelllungcancer-targetedtheranostics作者姓名：肖泽宇指导教师姓名：黄力罗良平及学历、职称：硕士、教授博士、教授学科、专业名称：临床医学、影像医学与核医学论文提交日期：2016年10月15日论文答辩日期：2016年12月08日答辩委员会主席：李子平教授论文评阅人：盲审1、盲审2、盲

2、审3学位授予单位和日期：暨南大学学位评定委员会年月万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文

3、的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：万方数据暨南大学博士学位论文摘要目的：本文通过合成对非小细胞肺癌（NSCLC）靶向成像与治疗的多功能纳米体系cRGD-PLGA-SPIO@DOX，运用IVIM-DWI-MRI技术准确监测肿瘤治疗效果，并利用免疫组织

4、化学、Westernblotting等方法，从mRNA和蛋白、细胞和动物模型等多个水平进一步深入探讨该多功能纳米粒子对NSCLC的作用机制，为NSCLC的一体化诊断与治疗提供新的理论基础及临床思路。方法：1、构建NSCLC靶向诊疗一体化纳米体系cRGD-PLGA-SPIO@DOX，并通过透射电子显微镜、纳米粒度仪、傅里叶变换红外光谱仪、核磁共振分析等方法表征其形貌、粒径、结构等；并检测不同pH环境下纳米体系的药物释放性能；进一步通过红细胞溶血实验检测其是否存在溶血现象。2、体外细胞部分：通过MTT法、细胞吸收及靶向封闭吸收实

5、验、流式细胞计量术、细胞ROS水平检测等方法分析cRGD-PLGA-SPIO@DOX对人非小细胞肺癌（A549）的抗肿瘤作用及作用机制。3、体外、体内MRI成像部分：通过临床型MR(GE1.5TSignaHDxt)检测SPIO、cRGD-PLGA-SPIO@DOX的T2弛豫性能和体外细胞T2成像；构建A549细胞裸鼠移3植瘤模型，待瘤体体积达到约500mm（长径约10~12mm），进一步比较分析不同纳米体系在体内的MR成像性能。4、体内动物部分：构建A549细胞裸鼠移植瘤模型，给药后绘制肿瘤生长-时间曲线。通过Ki67、CD

6、31、Cleaved-Caspase-3等免疫组化检测进一步评估纳米药物作用效果及机制；通过心、肝、脾、肺、肾各脏器的H&E染色及血液生化指标测试等方法评估纳米体系的药物毒性作用。通过大鼠多点动态取样法分析对比DOX和cRGD-PLGA-SPIO@DOX的体内药代动力学差异。5、IVIM-DWI-MRI动态评估纳米体系疗效：各组裸鼠在给药前、给药后3天、7天、14天和24天进行IVIM-DWI-MRI扫描，通过AW2.0工作站后处理得到标准ADC值、D值、D*值、f值等参数，并通过Pearson相关分析检测IVIM参数与免疫

7、组化技术的相关关系，以及IVIM参数早期相对变化值（7天）与肿瘤体积在24天相对I万方数据暨南大学博士学位论文变化的相关关系。结果：1、cRGD-PLGA-SPIO@DOX平均粒径是277nm，Zeta电位为25.7mV，电镜下呈分散性好、大小均一的圆球纳米体系。该纳米体系具有良好的pH响应性释放性能，在红细胞溶血实验中证实纳米体系没有发生溶血现象。2、cRGD-PLGA-SPIO@DOX（IC50为0.2μM）增加了单独DOX（IC50为0.41μM）对A549细胞的杀伤作用；同时该纳米体系（IC50为6.2μM）减小了D

8、OX（3μM）对正常成纤维细胞NIH-3T3细胞的毒性，安全系数比DOX增加了2倍。相比单独DOX，cRGD-PLGA-SPIO@DOX具有更好的A549细胞吸收效率。1µM的cRGD-PLGA-SPIO@DOX诱导A549细胞凋亡比例（36.2%）大于相同浓度的DOX（27.1%），并且