酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法

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1、微生物学实验实验三酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法刘森林执教单位生命科学学院观察酵母菌的形态，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。掌握酵母菌的一般形态特征。明确血球计数板计数的原理。掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。实验目的实验原理美兰染色检测酵母菌死活细胞的原理：美兰在氧化态时为蓝色，在还原态时为无色。活的酵母细胞具有还原能力，能使美兰保持为还原态，因此染色后死的为蓝色、活的为无色。酵母菌细胞计数的原理:将菌液放在已知体积计数室(1mm2×0.1mm)，计数室薄，因此每个细胞都可以被看到。体积确定，因此数完所有细胞后就知道单位体积的细胞

2、个数。一、酵母菌形态的观察（美蓝浸片的观察）1.在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌苔放染色液中，混合均匀。2.用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。注意：盖玻片不宜平放，以免产生气泡影响观察3.将玻片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜观察后用高倍镜观察酵母菌的形态，并根据颜色区别死活细胞。三.实验步骤:作业画图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，并说明死细胞和活细胞分别为什么颜色。三.实验步骤:二．显微镜直接计数法1.菌悬液的制备：以无菌水将酿酒酵母制成浓度适中的菌悬

3、液2.镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物，则需清洗，吹干后才能计数。3.加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意：取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。三.实验步骤:二．显微镜直接计数法4.显微镜计数：加样后静止5分钟，然后将血球计数板置于显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再用高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度再计数。一般样品稀释度要求每个中格内15-20个菌体为宜。

4、每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的一个中格）中的菌液进行计数。注：位于格上的菌体一般只数上方和右边线上的（计上不计下，计右不计左）。若遇酵母出芽，芽体大小与母细胞一样大时，即作为两个菌体计算。三.实验步骤:二．显微镜直接计数法5.清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行凉干。三.实验步骤:作业将结果记录于表中。P112，表1。下次实验：培养基的配制与灭菌。三.实验步骤:ThankYou!