动物实验的基本知识和操作技术

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'动物实验的基本知识和操作技术'
第二章 动物实验的基本知识和操作技术第一节 实验动物 药理学实验常用的动物有蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猫和犬等。常根据实验目的和要求选用不同的实验动物。由于不同的动物具有不同的特点,故所选用的动物应能较好地反映试验药物的选择性作用,并符合节约的原则。   (一)、 实验动物的选择原则   1、尽量选择与人体结构、机能、代谢及疾病特征相似的动物;   2、选用的实验动物的解剖、生理特点应符合实验目的;   3、根据人与实验动物对同一刺激的反应差异,选用具有明显反应的动物;   4、 根据生物医学研究必须达到的精确度,选用结构功能简单又能反映研究指标的动物;   5、选用患有人类类似疾病的近交系或突变系动物;   6、选用与实验设计、技术条件、实验方法等相适应的标准化动物;   7、在不影响实验目的与结果的前提下,选择最易获得、最经济、便于操作管理的动物;   8、 供实验用的动物应具备质量合格证。 (二)、常用实验动物的特点  1、蛙和蟾蜍 离体心脏能较持久地有节律地搏动,常用于观察药物对心脏的作用;坐骨神经和腓肠肌标本可用来观察药物对周围神经、神经肌肉或横纹肌的作用;蛙的腹直肌还可以用于鉴定胆碱能药物的作用。  2、小白鼠 是实验室最常用的一种动物。易于大量繁殖,且价廉,适用需要大量动物的实验,如药物筛选、半数致死量测定、药物效价比较、抗感染、抗肿瘤药物及避孕药物的研究等。 3、 大白鼠 与小白鼠相似。一些在小白鼠身上不便进行的实验可选用大白鼠,如药物抗炎作用的实验常选用大白鼠踝关节制备关节炎的模型。此外,也可用大白鼠直接记录血压、作胆管插管,或用大白鼠观察药物的亚急性或慢性毒性。大白鼠的血压和人相近,且稳定,现常用于抗高血压药物实验。  4、豚鼠 是实验室常用动物之一。对组织胺很敏感,容易致敏,常用于平喘药和抗组胺药的实验。对结核菌亦敏感,故也用于抗结核药的研究。此外还用于离体心脏及平滑肌实验,其乳头肌和心房常用于电生理特性及心肌细胞动作电位实验,研究抗心律失常药物的机理。  5、家兔 温顺、易饲养,常用于观察药物对心脏、呼吸的影响及农药中毒和解救的实验。亦用于研究药物对中枢神经系统的作用、体温实验、热原检查及避孕药实验。  6、猫 与家兔比较,猫对外科手术的耐受性强,血压较稳定,故常用于血压实验,但价格较贵。此外,猫也常用于心血管药物及中枢神经系统药物的研究。  7、犬 药理实验需大动物时常用犬。常用于观察药物对心脏泵功能和血流动力学的影响,心肌细胞电生理研究,降压药及抗休克药的研究等。犬还可以通过训练,用于慢性实验研究,如条件反射、高血压的实验治疗、胃肠蠕动和分泌实验、慢性毒性实验。 (三)、实验动物选择的注意事项   由于动物对外界刺激的反应存在个体差异,在选择实验动物时,还应注意动物的年龄、体重、性别、生理状态、健康状况及其品系、等级等因素对实验的影响。二、实验动物的性别鉴别与编号  (一)、 实验动物的性别鉴别  药理学实验常用的动物中,较大的动物(如家兔、猫、犬等)可以从生殖器分辨其性别,而较小的动物(如小白鼠、大白鼠、豚鼠等)的性别鉴别,通常以肛门与生殖孔之间的距离来判断,距离近者为雌性,距离远者为雄性。  (二)、实验动物的编号  药理实验中常用多只动物同时进行实验,为避免混乱应将动物进行编号。实验动物编号的目的在于将观察范围内的同种动物进行区别,以便于观察。常用的方法有染色法、耳缘剪孔法、烙印法和号牌法等,可根据实验目的、动物种类和具备的条件选用,一般编号应具有清晰易辨、简便耐久的特点。猫、犬、兔等较大的动物可用特别的号码牌固定于身上。小白鼠、大白鼠及白色家兔等用黄色苦味酸涂于动物不同部位进行染色标记而编号。例如在小白鼠,右前肢皮肤外侧涂色标记为1号,腹部右外侧皮肤涂色标记为2号,右后肢皮肤外侧涂色标记为3号,头部皮肤涂色标记为4号,背部正中皮肤标记为5号,尾巴根部标记为6号,7、8、9号在左侧同1、2、3号,第10号不涂黄色。大白鼠的编号与小白鼠相同。 第二节 实验动物的捉拿、给药和处死方法(一)、小白鼠、大白鼠 1、捉拿法:小白鼠 可采取双手法和单手法两种形式。  双手法:右手提起鼠尾,放在鼠笼盖或其他粗糙面上,向后方轻拉,小白鼠则将前肢固定于粗糙面上。此时迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠颈背部皮肤(图1),并以小指与手掌尺侧夹持其尾根部,固定于手中。  单手法:小白鼠置于笼盖上,先用左手食指与拇指抓住鼠尾,手掌尺侧及小指夹住尾根部,然后用左手拇指与食指捏住颈部皮肤。 图1 小白鼠的捉拿方法 图2 大白鼠的捉拿方法大白鼠 容易激怒咬人,捉持时左手应戴防护手套或用厚布盖住大鼠,先用右手抓住鼠尾,再用左手拇指和食指握住头部,其余手指与手掌握住背部和腹部(图2)。不要用力过大,切勿捏其颈部,以免窒息致死。 2、给药方法小白鼠 (1)、灌胃(po):左手固定小鼠,右手持灌胃器,灌胃针头自口角进入口腔,紧贴上腭插入食道(图3),如遇阻力,将灌胃针头抽回重插,以防损伤。常用灌胃量为0.1~0.2 ml/10g。(2)、皮下注射(ih):可用腹部、背部、腹股沟的皮下,此处皮肤比较松弛,也可由助手协助。注药量一般为0.1~0.2 ml/10g。 (3)、肌肉注射(im):一人抓住小鼠头部皮肤和尾巴,另一人持连4号针头的注射器,将针头刺入后腿外侧肌肉。注射量一般不超过0.1~0.2 ml/只。 (4)、静脉注射(iv):将小鼠置入固定器,酒精涂擦尾部,以使血管扩张。自尾部末端刺入,刺入血管后抽针芯可见回血。常用注射量为0.1~0.2 ml/10g。 图3 小白鼠的灌胃方法 图4 小白鼠的腹腔注射方法(5)、腹腔注射(ip):将小鼠固定后,从下腹部外侧进针,深度较皮下注射深(图4)。常用注射量为0.1~0.2 ml/10g。  大鼠 灌胃、腹腔注射、皮下注射及尾静脉注射与小鼠相似。静脉注射也可在麻醉下行舌下静脉注射。 3、处死方法(1)、颈椎脱位法: 术者左手持镊子或用拇指、食指固定小鼠头后部,右手捏住鼠尾,用力向后上方牵拉,听到鼠颈部喀擦声即颈椎脱位,脊髓断裂,鼠瞬间死亡。 (2)、打击法:用手抓住鼠的尾并提起,朝地面用力撞击鼠头致死(也可用小木锤用力打击鼠头 (3)、吸入麻醉法:吸过量的乙醚。 (4)、大量放血法:可采用眼眶动、静脉放血致死。(5)、空气栓塞法:将空气急速注入静脉致死。小白鼠可注入0.3-0.5ml空气。(二)蛙和蟾蜍 1、捉拿法:左手握持蛙或蟾蜍,食指和中指夹住左前肢,拇指压住右前肢;右手将双下肢拉直,左手无名指及小指将其压住而固定。此法用于淋巴囊注射。毁脑和毁脊髓则用左手食指和中指夹持蛙或蟾蜍的头部,拇指和无名指小指握持双下肢,右手持
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