miRNA_内参的选择

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1、microRNA研究的整体解决方案科学家在体内发现相似的内源性小RNA基因沉默机制——miRNA。这是一种广泛存在于真核生物中的内源性单链小分子RNA(~22nt)，特异性抑制基因翻译1993年，Lee等在秀丽新小杆线虫中发现第一个可时序调控胚胎后期发育的miRNAlin-4；2002年，Reinhart等又在线虫中发现第二个异时性开关miRNA家族let-7现有发现已证明miRNA在真核生物基因调控中起着重要作用，广泛参与了细胞增殖、分化、发育、代谢、凋亡等多种生理活动2©2008AppliedBiosystemsmicroRNAsiRN

2、ARNAi的活性形式，病毒感染和人工插产生细胞内固有成分之一（正常）入dsRNA之后诱导而产生（异常）来源内源转录本转基因或病毒ＲＮＡ（外源）直接来源Pri-miRNA，形成发夹形状dsRNA双链，3‘端有2个非配对碱基，通常为结构单链UU互补性完全互补/不完全匹配完全互补较高，一个突变即引起RNAi沉默效应对靶RNA特异性相对较低，一两个突变不影响功能的改变在RNA的各个层面进行调控，调节内在转录后水平发挥作用，影响mRNA对RNA的影响源基因的表达，在蛋白质合成水平发的稳定性；降解靶mRNA；抑制转座挥作用子活性和病毒感染；3©2008

3、AppliedBiosystems通过Exportin5进入细胞质经过Drosha切割，形成60~70nt长度的茎环结构pre-miRNA经Dicer切割茎环,形成双链小RNA双链RNA解体,形成成熟miRNA核DNA转录pri-装配形成miRISCmiRNA不完全匹配结合在3’UTR，抑制靶基因蛋白翻译完全匹配，靶基因mRNA降解4©2008AppliedBiosystems5©2008AppliedBiosystemsmicroRNA功能范例OncogenicmutationmiRNA-let-7RAS原癌基因抑癌基因Johson,20

4、05p53抑癌基因miR-372/miR-373LATS2p21抑癌基因原癌基因抑癌基因Voorhoeve,Cell,2006CDKs原癌基因Cyclin细胞增殖失G1期ÆS期控，产生癌变P53pathway6©2008AppliedBiosystemsmiRNA在动物与植物中的功能•发育•Timing(Leeetal.1993)•Cellproliferation(Brenneckeetal.2003)•Stemcell&neuron(Krichevskyetal.2003;Hatfieldetal.,2005)•细胞死亡(Baehrec

5、ke,2003)•疾病•肿瘤(Luetal.2005)•原癌miRNA(Heetal.2005)•脑肿瘤(Ciafreetal.2005;Chanetal.2005)•白血病(Calinetal.2002;2004)•糖尿病(Poyetal.2004)•胆固醇的生物合成(Krutzfeldtetal.2005)•DNA甲基化与染色质修饰(Baoetal.2004)7©2008AppliedBiosystemsWhat’snewaboutmiRNAresearchin2007-8?●MicroRNApublicationsincreaseds

6、ignificantly●人类有多少microRNA?–By2003:145genes/152maturemiRNAs(SangerRelease3.0)–By2004:192genes/207maturemiRNAs(SangerRelease5.1)–By2005:281genes/319maturemiRNAs(SangerRelease7.1)–By2006:411genes/455maturemiRNAs(SangerRelease9.0)–By2007:541genes/733maturemiRNAs(SangerRelease

7、10.1)–By2008:695genes/866maturemiRNAs(SangerRelease12.0)–预测的所有人类microRNA总数•~1,000(Landgrafetal.2007,TuschlLab)•>25,000(Mirandaetal.2006,IBMBioinformaticsGroup)8©2008AppliedBiosystemsmiRNA研究的基本问题诊断何时何处表达miRNA?miRNA表达分析miRNAs控制了表达了什么miRNA?那些基因?分离,克隆,功能研究测序哪些重要的miRNA参与调控了某个生物

8、过程?miRNA文库筛选治疗9©2008AppliedBiosystemsAB公司microRNA研究完整解决方案发现新miRNAmiRNA分离miRNA检测miRNA功能分析•