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1、测定茶叶氨基酸总量的萌三酮显色法庐山植物园张自力一、引言,,ne茶叶中的氨基酸共有三十多种其中以谷氨酞乙胺即茶氨酸(Theain)含量最,,。,高约占茶叶氛基酸总量的“%而为茶叶所特有茶叶氨基酸的组成与含量以及它们,。,的降解和转化产物都直接影响茶叶品质例如与茶叶嫩度和香气形成关系密切对茶叶,,,,,滋味有较明显的影响可认为是构成茶叶滋味鲜甜苦涩四大味要素中鲜味物质的,。主体因而在很大程度上是茶叶滋味好环的主要标志中国农科院茶叶研究所对1夕之2年杭,,,。炒青各级标准样茶进行了氨基酸总量多酚类咖啡碱水浸出
2、物及其容量的研究结果:,。表明茶叶氨基酸总量与杭炒青各等级的品质呈正相关而巨级差较明显这对理化审评。茶叶具有重要意义目前几种测定茶叶氨基酸总量的方法都比较繁项,。所用仪器设备昂贵欲求一种快,。速简便地测定方法而为茶叶品质的化学审评提供客观标准本实验应用苗三酮溶液显色法,,。的原理测定了庐山不同海拔高度的几种茶叶氨基酸总量的变化以便与大家共同商榷二、实验方法、:一原理,,,。氨基酸为无色物质需要适当的试剂使其显出一定的颜色借此测定其含量茶叶a,。。中氨基酸大多为一氨基酸易溶于水因此茶叶中氨基酸可用热水提取所
3、得试液在一,a,,:定的酸度和温度条件下一氨基酸与布三酮反应生成兰紫色化合物其作用机制如下曰ltO“”`:厂、、辛C。。二洲、协)沪_成!一`一曰一口沐一【l一八O水合苟三酮氨基酸还原型水合茹三酮。CIO亡二洲。。。们。。。。人丫尹/.、几厄.es
4、/.l火.,1必1户è沐甲ě闪七尸O+悦日+Cùù一已一日、布三酮还原型水合苗三酮兰紫色化合物`zon。,此兰紫色化合物在波长m处为最大吸收若以茶氨酸为标准物质在本文实验条:,。注比色标准物质茶氛酸系日本进口的纯度为分析纯品级8,,。件下氨丛酸浓度与显色深
5、浅符合比耳定律可用于氨基酸总量的定量测定二、试荆配制:~获右-..:,(1)o3mM标准茶氨酸溶液称取00`2克茶氨酸(注明由来及品位)溶厂水中。加水定容至10口。毫升)...,:(2)PHS0口ZM柠檬酸缓冲溶液21而8克柠檬酸(含1份结晶水》溶于200毫升,。。蒸馏水中再如人20毫升IN氢氧化钠溶液以蒸馏永稀释至“o毫升0.:0.,,。(劝01M氰化钾溶液1628克氰化钾溶于水中稀释至2“毫升备用(4)氰化钾乙二醇甲醚:1.2`克荀三酮溶于s2毫升布三酮溶液乙二醇甲醚5v—。2`—.使成%(W/)溶液
6、将毫升小IM氰化钾溶依用乙二醇甲醚溶液稀释至125毫升充分。混合然后把125毫升氰化钾一乙二醇甲醚溶液与25毫升布三酮一乙醇甲醚溶液迸行混合,置棕色瓶中待用。正常情况下应为浅黄色`。荀三酮重结,错`最;·带有。成的溶液也带红色`,影响比色礴瞥命些缅桂挂趣微红色舰。。.,测定需重结晶一次方可应用方法是将:克荀三酮溶于“毫升热水中加入025克活性。,,。炭轻轻摇动若溶液太浓不易操作可酌丸吓卜,o毫升水放置““分钟后用滤纸过滤滤,。。液放冰箱过夜次晨即见黄白色结晶出现过滤再以1晶,置干燥器中毫升冷水洗涤结。,。
7、干燥最后装入除色瓶内密封避光保存3::-乙二醇甲醚(0cH:cHoH),cH的处速市售的乙二醇甲醚长期放置后往往台们。’少量过从化物,影响荀三酮因此,:落液显色在使用前应当进行以下处理,。。将:克硫酸亚铁加入:“克乞二醇甲醚中振摇,一2小时过滤去除硫酸亚铁再在蒸,’。收集沸点21一1℃馏分,时应为无色诱明液体馏瓶中蒸馏加儿比。(s)60%乙醇溶液、:三洲定方法、:2标准l伯线的绘制.,.,..,..一,,,二,分别取口102刀了06口s了口毫升o3mM标准茶氨酸溶液置J试管中不足,。;。,.,1毫升者加水
8、至1毫升以1毫升蒸馏水为空白对照在上述各试管中加入1毫升PHS0.。021,M柠朦酸缓冲溶液充分混合然后加入毫升氰化钾一乙二醇甲醚一苟三酮溶i夜充分,。。,混合后在沸水浴中加热站分钟用自来水冷却放置`一10分钟后以J毫升60%乙醇稀.。.。,,释充分摇匀后移入口scm比色杯中按由稀到浓的顺序以试剂空白为参比在波长。,,“口nm处分别测定其光密度并以光密度值为纵坐标茶氨酸的毫克分子浓度为横坐标。绘制标准曲线(图一)、?2试洋中氨基酸总量的测定__(I)试液的制备牛七ùz///取茶样1.口口口。,(粉碎并通过
9、勿目筛孔)克加沸水80屯一升。在沸水浴中浸提劫汾钟后,趁热过滤,~。万石布丁石万不了不不石万不丫i、.。定容至]仰毫升(.图1氛基酸标准曲线2)比奋.,,。取试液口1毫升置于试管中以水补足1毫升,并以1毫升水作参比按绘制标准曲,;。线的操作步骤测定其光密度并从标准曲线上查得相应的氨基酸的毫克分子浓度四、注意事项。,(I)试液中的蛋白质及糖类对本法稍有干优而咖啡碱对本法干扰不明显由前述方法:,。的反应机制可看出氨与草三酮反应能显
