酵母细胞自溶条件的研究

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1、科学试验与研究酵母细胞自溶条件的研究11122姚晓红吴逸飞汤江武叶有标余志宏1.浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所2.浙江衢州出入境检验检疫局摘要研究NaCl添加量、pH、温度及时间等条件对酵母培养物液体摇瓶的自溶效果的影响,确定其最佳自溶条件:不添加NaCl,pH5.0,温度50℃,自溶40h,自溶后样品中游离氨基酸含量从初始0提高到1.068g/100mL,可溶性蛋白含量从初始0提高到1.237g/100mL,分别比单因素条件下自溶时提高2.96倍和1.15倍。关键词酵母液体培养自溶条件游离氨基酸

2、可溶性蛋白中图分类号:S852.6文献标识码:A文章编号:1002-2813(2007)12-0005-04酵母菌体具有坚固的细胞壁,用作饲料中消化(添加NaCl、pH、温度和时间)→加热灭酶(80～率低,适口性差,因此,有必要对其进行预处理。酵95℃,10min)→混匀→测定比浊度→离心分离母自溶的目的是提高酵母的适口性和可消化性,减(5000r/min,10min)→上清液→测定游离氨基酸和少酵母生命活动带来的损失。此外,自溶使酵母乳蛋白质含量。黏度降低,消除泡沫和排除空气及CO2,有利于进行1.2.

3、2自溶条件的研究干燥、自溶指标及检测方法建立。1.2.2.1NaCl添加对酵母自溶效果的影响酵母自溶是借助酵母菌体的内源酶(蛋白酶、核向装有制备好酵母泥的各个离心管中,分别加酸酶和碳水化合物水解酶等)将菌体的高分子物质入NaCl1%、2%、3%和4%,以不添加NaCl作对水解成小分子而溶解出菌体外的过程。在自溶物中照,加入蒸馏水30mL,每重复3管,置于50℃水浴分别含有原有的菌体和自溶时降解出来的可溶性物中,自溶24h,加热灭酶,测定各项指标。质,其中包括游离氨基酸、核苷酸、肽、糖分、B族维1.2.2.

4、2pH对酵母自溶效果的影响生素、麦角甾醇及各种香味成分。文章对影响酵母向装有制备好酵母泥的各个离心管中,分别加自溶的因素和条件进行较深入的研究和探讨。入pH4.0、5.0、6.0、7.0和8.0的缓冲液30mL,以1材料与方法蒸馏水为对照,不添加NaCl,每重复3管,置于50℃1.1材料水浴中,自溶24h,加热灭酶,测定各项指标。酵母摇瓶:于500mLPDA液体培养基中接一环1.2.2.3温度对酵母自溶效果的影响酵母斜面菌种,于28℃,220r/min培养20h。向装有制备好酵母泥的各个离心管中,加入1.

5、2方法30mLpH5.0醋酸—醋酸钠缓冲液,不添加NaCl,每1.2.1工艺流程重复3管,分别于40、50、55、60和70℃水浴中自溶酵母摇瓶(多瓶)→倒入干净的大瓶中混匀→准24h,加热灭酶,测定各项指标。确量取30mL于50mL离心管中,5000r/min离心1.2.2.4时间对酵母自溶效果的影响5min→弃上清→加入30mL无菌水清洗,向装有制备好酵母泥的各个离心管中,加入5000r/min离心5min→弃上清→再加入30mL无菌30mLpH5.0醋酸—醋酸钠缓冲液,不添加NaCl,每水清洗,50

6、00r/min离心5min→弃上清→得到酵母重复3管,于50℃水浴自溶,每4h取样测定,连续泥→自溶(测定初时游离氨基酸和蛋白基本为零)测定至56h。收稿日期:2007-09-04饲料研究FEEDRESEARCHNO.12,20075科学试验与研究1.2.2.5自溶条件正交试验降率逐渐减少,自溶后的蛋白质和游离氨基酸含量4自溶条件的优化采用4因素3水平L9(3)正交也随之逐渐减少,而不添加NaCl的对照组从比浊度试验,共设9个处理,每处理有3个重复试验,各参下降率及自溶后蛋白质和游离氨基酸含量来说,均数的

7、水平值根据单因素试验的结果。选择NaCl添明显优于添加NaCl的试验组。这项试验结果与钟加量、pH、温度及时间做正交试验,最后筛选出优化文辉等报道的结果不同,因此,这项试验选择不添加组合。NaCl。1.2.3检测方法2.1.2pH对自溶效果的影响酵母菌数测定—光电比浊法。酵母细胞内含有多种蛋白酶,pH影响这些酶的游离氨基酸总量测定—茚三酮法。活性,从而影响蛋白质的降解程度。据报道,酵母细蛋白质含量测定—Folin-酚法。胞内蛋白酶的适宜作用pH一般在5～8。pH大于2结果与分析8,自溶过程中易变黄发臭。因

8、此,选择pH4.0～8.02.1酵母自溶条件的研究进行自溶试验,结果见图3和4。2.1.1NaCl添加对酵母自溶效果的影响资料表明,NaCl能有效促进酵母细胞自溶,还具有防腐、调味和除臭作用,是理想的质壁分离剂。因此,试验中选择NaCl添加量分别为1%、2%、3%和4%,以不添加NaCl作对照,结果见图1和2。图3pH对酵母自溶前后比浊度下降的影响注:以自溶前0小时的比浊度为100%计算比浊度的下降率图1NaCl对酵母自溶前后