实验5 大黄中蒽醌类的提取与分离

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1、大黄中蒽醌类的提取与分离指导老师：肖靓小老师：罗天明潘少涛武雪莹大黄中蒽醌类的提取与分离实验原理2实验材料3实验步骤4思考题5实验目的1一、实验目的掌握大黄中蒽醌类化合物的提取、分离原理。熟悉大黄中蒽醌类化合物的结构及主要理化性质。了解大黄中蒽醌类化合物的提取分离新进展。知识要求能力要求学习目的掌握大黄中蒽醌类化学成分的提取分离技术。熟练进行大黄中蒽醌类化合物的提取、分离及鉴定操作。学会大黄中大蒽醌类化合物的色谱鉴定技术。231二、实验原理大黄(RheumpalmatumL.)蓼科多年生草本植物，掌叶。大黄的干燥根可入药，性寒味苦，具有清热解毒、活血化

2、瘀、泻火凉血等多种作用。大黄中主要有效成分及结构大黄中化学成分复杂，主要以蒽醌衍生物为主。包括游离蒽醌、蒽醌苷、二蒽酮苷、鞣质等。游离蒽醌主要有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸。R1R2大黄酚CH3H大黄素CH3OH大黄素甲醚CH3OCH3芦荟大黄素HCH2OH大黄酸HCOOH提取分离原理大黄中的蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元，苷元可溶于乙醚而被提取出来。再利用各种蒽醌类化合物酸性不同，采用pH梯度萃取法分离得到各种蒽醌类化合物。三、实验材料器材：500ml圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管、30cm层析缸、标本瓶、索氏提取器一套、2

3、50ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、薄层板、喷雾器、广泛PH试纸药品：大黄20g、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、硅胶G、CMC四、实验步骤1.粉碎2.酸解3.水洗、抽滤、干燥4.索式提取5.萃取结晶6.硅胶薄层层析7.纤维素柱层析1.粉碎将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到大黄粗粉，经80目筛子得到大黄细粉。80目2.酸解取大黄粉20g，加20%H2SO4200ml，在70℃水浴上加热3~4小时。70℃20g3.水洗、抽滤、干燥抽滤，滤饼水洗至中性后，于70℃左右干燥，研成粉末。真空泵水

4、洗至中性4.索式提取器圆底烧瓶内的抽提剂受热挥发，蒸气经导气管向上，在冷凝管中冷却为液体，滴入装有样品滤纸筒的管中，使样品浸在纯净的抽提剂中。待提取物质逐渐从样品中溶解到抽提剂中。当样品管中的抽提剂液面逐渐上升到与回流管（虹吸管）上端齐平时，在虹吸作用下，携带所提取的物质一同从侧面的虹吸管流入烧瓶中即完成一轮循环。实验装置提取过程滤饼经干燥后，置索氏提取器中以乙醚约150ml回流提取3~4小时，得乙醚提取液。注意颜色的变化喔～初步检测乙醚提取液经薄层检查含有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。检测方法：取硅胶-CMC-Na板，将上述乙醚提取

5、液点样后，用石油醚（60-90℃）-醋酸乙酯（7：3）为展开剂，展开晾干，在可见光下观察，可见到4个黄色斑点，Rf值由大到小分别是大黄酚与大黄素甲醚的混合物、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色。5.pH梯度萃取取乙醚提取液2/3量，置250ml分液漏斗中。1、大黄酸：用2.5%NaHCO3溶液60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调pH2-3,抽滤，得大黄酸沉淀。2、大黄素：分离出大黄酸的乙醚层，用2.5%Na2CO3溶液60ml分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调pH2-3,抽滤可得大黄素沉淀。3、芦荟大黄素：分离出大

6、黄素的乙醚层，继续用2.5%Na2CO3溶液60ml分四次萃取，合并四次萃取液，用浓盐酸调pH2-3,抽滤可得芦荟大黄素沉淀。4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分离出芦荟大黄素的乙醚层，用0.5%NaOH溶液60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲醚混合物。酸化结晶酸化后碱液6.硅胶薄层层析薄层层析是一种快速分离和定性分析少量物质的实验技术。它是将某种吸附剂在玻璃板（或硬制塑料板等）上均匀地铺成薄层，把待分析鉴定的样品溶液点在薄层的一端，然后选择合适的溶剂作为流动相（展开剂），在密闭的层析缸内进行层析，从而达到

7、分离鉴定的目的。本实验中吸附剂：硅胶—CMC展开剂：石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯＝7：3薄层的制备2g硅胶G+20ml0.25%CMC，混合均匀取20cm×5cm的光滑洁净玻璃板一块，水平放置，将已调制好的硅胶G均匀地涂布于玻璃板上取一洁净的玻璃棒，两手用拇指，食指，中指控制住玻璃棒的两端并始终保持玻璃棒与桌面平行。调整玻璃棒高度使之与玻璃板间的距离约为1.0mm将玻璃棒从硅胶面上由上至下缓慢匀速拉下。重复两到三次，直到将硅胶层铺好为止（铺好的薄层可以清晰地看见玻璃板下面的手指！）将硅胶板室温干燥30分钟后置于烘箱内，缓慢升温至105℃左右烘烤20

8、分钟（使硅胶活化），然后放入干燥箱备用。105℃活化薄层层析用铅笔在距硅胶板点样端约2cm处平