[精品]电泳图案分析

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1、“Smearing”，导致拖尾效应有很多的原因，最终要的是丙烯酰胺灌制的不够均匀和样品量过大！这是当时学生制胶时底下已经凝固，然后再重新补上一部分的浓缩胶和分离胶所致！当然重叠在一起，无法区分也是难免了。样品量过大而出现了样品“交叉”污染，正常的当载样在20to40micrograms/well将会很漂亮。样品量过大，当然胶灌制的也不够均匀。由于过量的样品影响了个别泳道的电场，使的有些条带宽，有的窄些。MSmearing,｝（注意泳道4）,这可能和样品中的含有大量脂类的膜相关蛋白引起的：由于不连续的胶中，样品被浓缩的很厉害。所有样的迁移速率在样品过积层胶后都会慢下来，当到达分离胶时，P

2、H的改变使得聚集的膜相关蛋白有沉降的倾向，但另一个方面，电泳过程又不断的溶解这些蛋白，因此便出现了泳道4中连续的黑色托尾，通过Western验证后，这些都是一个组分造成的！这张还不是太糟糕。泳道4还加上飞纹，原因是样品未能处理好，上样量控制的也不够好，另外跑的过程可能电压过大；另外这张胶当时做的时候，分离胶凝固的并不是很好，蛋白穿过胶孔时，浓度并不均-，因此形成了飞纹而不是一片黑色托尾。由于样品跑的比较直且齐整，因此电场还是比较均匀的。泳道5中的蛋白没有很好的溶解。简直一塌糊涂先做好分离胶时，没有封闭。另外，样品很快的沉降到不平整的脚面上，随着电泳的进行，样品不断的融解，以至形成托尾而

3、不是一条条清洗的条带。另外，这个样品可能含有杂质比较多（不溶性杂质或基因组DNA）,可见上样前的充分离心也是必要的!条带太淡。背景脏且不够均匀，说明电泳缓冲液有污染（杂质在电泳过程中不断的进入胶中）,或者板子没有洗干净。在漠芬兰线的后面还有连续的细线，说明上样不够小心，致使样品飞了出孔，同时也污染了其他的相临样品。完全是染液重复利用惹的祸，对于这张（只有下面着色），只要重新再染，效果还是可以的。原因1D这是一张银染的结果。本来一切都小心奕奕的，结果把胶放到去离子水中回家了，过了一夜，第二天染色结果变成这个样子了，呵呵〜~定在胶中的蛋白都溶到水里了。电泳停的太早。如果能继续再跑，效果就好

4、了，当然，缓冲液必须有足够的缓冲能力，否则会引起扩散。这张图大家最主要的看看是胶孔作的不够齐整（我用箭头标出了）0另外，可能由于选用旧的上样缓冲液，致使2-mercaptoethanol挥发，电泳的样品没有完全处于变性状态下，这使得跑出的结果难以很好预测。胶的浓度过大（不是自己的，浪费也不心疼），只有少量的小分子蛋白能入胶；由于胶的浓度过大，聚合不够均匀，载样过大，岀现上面的情况自然是必然的了！■■・w13可能由于选用旧的上样缓冲液，还原试剂已经挥发，另外缓冲液中SDS的量也应该稍微的补加（可能有析出），样品根本无法进入胶中。只有让分离的蛋白入胶，才能进行良好的分离。要么样品盐浓度过高

5、，要么分离胶不均匀。因此应该把部分样品中的盐透洗除去，或者一直采用较小的电流来跑，可能效果会稍微的好一点点。当然，根本的还是应该去盐份（如果重复结果一致的话）□做的好图。