高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量

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1、实验室应用案例高效液相色谱仪测定黄茂中的黄茂甲昔含量2018年3月Saimaer®instrument版权所有©sainaerCorporation保留所有权利1摘要本文建立了一种根据《中国药典》2015版要求，测定中药饮片黄罠中黄罠甲昔昔含量的高效液相色谱方法，按中国药典条件，适当调整柱温，苦杏仁昔保留时间RSD%在0.17%,峰面积RSD%为1.64%。关键词：屮药饮片黄罠黄罠甲昔E800型蒸发光散射检测器高效液相色谱黄罠甲昔是一种从黄罠上提取出来的高纯度药物，有“超级黄罠多糖”之称。黄罠甲昔能增强机体免疫力、提高机体的抗病

2、能力。黄罠多糖中的主要有效成份是多糖和黄罠背。黄罠昔分为黄罠昔I、黄罠昔11、黄罠昔IV。其中牛物活性最好的是黄罠营IV即黄罠甲营。黄罠甲营不仅具有黄英多糖的作用，还有些是黄罠多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄罠多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄罠多糖的30倍。山于含量少，效果好，更是有“超级黄罠多糖”之称。OH图1黄罠甲营结构式2检测部分2.1仪器本实验使用赛那尔II6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台E800蒸发光散射检测器、一台柱温箱溶剂管理器和sparkAlias自动进样器；sainae

3、r色谱工作站。2.2分析条件色谱柱：岛津WondaSilC18Superb5um流动相:乙月青:水=32:68(V/V)流速：lml/min柱温：35°C气体流量：2.8L/min蒸发温度：75°C进样量：10uL等度洗脱2.3标准品溶液的配制和样品处理标准品品溶液的制备取黄茂甲苻对照品适量，粘:密称定，加甲醇制成每lml.含0.5mg的溶液，即得。样品溶液的制备取干燥的黄罠切片，粉碎后，取中粉约4g,精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml,冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml,微

4、热使溶解，用水饱和的止丁醇振摇提取4次，每次40ml,合并止丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml,弃去氨液，正丁醉液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过【）101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm,柱高为12cm）,以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，熬干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即制得黄罠样品溶液。3结果3.1标样的色谱图>E)DTe8161图20.5mg/ml标准品色谱图3^~线性关系将配制浓度为0.5mg/ml的

5、标准溶液，分别精密吸取对照品溶液2.5M八5uL.10uU15uU20uL,供试詁溶液20UL,注入液相色谱仪，测定，以峰而积对数为横坐标，已进样量对数为纵坐标绘制工作曲线，所得曲线良好，R达到0.999以上。标准品的浓度及峰而积的结果见表1。图3黄罠甲昔的标准曲线级别进样体积(uL)峰面积12605225505213102247854156875125201410518表1黄罠甲昔进样量及峰面积3.3精密度试验50mg/ml的苦杏仁昔标准品连续测定6次，如表2所示：考察方法的精密度，1［呆留时间和峰面积的RSD%结果序号保留峰

6、面积111.591142152211.542145212311.458144879411.523148721511.542148524611.554144258平均11.535145624RSD%0.3811.750表2黄茂甲昔重复性数据(n=6)3^~样品测试-使用2.3配制好的黄英甲昔样品溶液得出图4图谱:图4黄罠样品图谱组份名保留时间(min)面积浓度(mg/ml)黄罠甲苗10.10823263430.106表3黄罠中黄罠卬昔测定结果4结论经方法有效性测试，本方法的工作曲线好R=0.999以上。数据重现性好，保留时间RSD

7、%=0.38%(n=6),小于国家要求0.5%以内，峰面积RSD%=1.75%(n=6),小于国家要求2.0%以内。并且峰形完好，拖尾因子为1.02。说明此方法适用于检测黄茨中黄艮甲昔的含量。5客户现场照片