CP基因转化的线辣椒抗卡那霉素和抗CMV特性的遗传

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1、第!"卷第#期西北农林科技大学学报（自然科学版）$%&’!"(%’#!))*年*)月+%,-’%.(%-/0123/456782509:6;’%.<=-6’>:?@%-（’(>/’456’A?’）B5/’!))*!"基因转化的线辣椒抗卡那霉素和抗!#$特性的遗传!商鸿生，王旭，徐秉良（西北农林科技大学植保学院，陕西杨陵C*!*))）［摘要］利用根癌土壤杆菌，采用叶盘法转化线辣椒（!"#$%&’("))’’(;>-’*+),’)-）优良品种陕D!*!，建成了能同时表达EF$和8F$外壳蛋白基因（EG基因）的8代纯合系。以其自交8代，以及8代植株与未*!8H!转化陕D!*!杂交的@代和

2、@代群体为试材，研究了抗卡那霉素和抗黄瓜花叶病毒（EF$）特性的遗传传递规律。*!结果发现，抗卡那霉素标记基因和抗病性基因在自交和杂交各代都能稳定地高效表达；两者在自交各代纯合；在杂交@代抗药性和抗病性都表现为显性；在杂交@代，抗药植株对敏感植株，以及抗病植株对感病植株的分离比都*!符合IJ*的理论比例。表明抗药性和抗病性均为显性单基因遗传。［关键词］转基因线辣椒；EG基因；EF$；卡那霉素；抗病性遗传［中图分类号］KCD#；4LH*’I［文献标识码］<［文章编号］*)))7!CD!（!))*）)#7*)I7)H线辣椒（!"#$%&’("))’’(;>-’*+),’)-）是重性的8

3、代植株，自花授粉获得了8代植株，在保留)*要的经济作物，易遭受以黄瓜花叶病毒（EF$）为主和测定的**I株8代植株中，仅!)株抗病。根据*的多种病毒侵染，常造成严重减产。因缺乏抗源，针植株抗卡那霉素测定和GEP分析结果，*)个8代*对EF$的常规抗病育种工作进展缓慢。作者等从株系是纯合的。纯合系逐代自交获得了8，8和!I*"DD年开始，利用病毒外壳蛋白基因（EG基因）转8H代群体。进一步的分子生物学检测表明，8I代化策略，将EG基因导入线辣椒，现已成功地建立了植株稳定表达EF$7EG基因和8F$7EG基因。转基因线辣椒纯合系，在人工攻毒和田间自然发病4%,/02-:M&%/分析表明

4、其基因组中具有87Q(<拷条件下，都获得了抗病性的高效表达。转基因植物贝，P87GEP分析测到了EF$7EG基因和8F$7EG可以直接使用，也可能用作抗源，用于抗病育种，为基因转录物，R23/2-:M&%/分析证实8代植株中病I此必须了解其抗病性遗传规律。本研究是在转基因毒EG的合成［*］。上述植物材料的建立和检测是中线辣椒纯合系选育过程中，对此进行了初步探讨。科院微生物研究所三室与本项目组合作完成的。几个8代纯合系的8，8和8代自交群体，8代植*!IH!*材料和方法株与未转化陕D!*!杂交的@和@代群体用于遗*!*’*植物材料传分析。供试病毒为黄瓜花叶病毒山东株系转基因植株是利用

5、根癌土壤杆菌（.,/+0"&-1/%2（EF$7Q），毒源用常规方法保存备用。’(-’(13"&%1)&1）介导法获得的。为此，首先构建了*’!抗卡那霉素标记基因表达测定具有E>F$I#4启动子和-M54转录终止信号和抗供试植物材料种子，经质量分数为)’*S升汞卡那霉素标记基因，能同时表达EF$和8F$外壳液表面灭菌和无菌水冲洗后，播种于含I))／TU!=蛋白基因的中间载体NO8E，通过去毒根癌土壤杆卡那霉素的F4培养基上，置于!)!#V，日照*H0菌，采用叶盘法转化线辣椒品种陕D!*!的外植体，的光照培养室内，I)?后检查，根据根系、子叶等形获得了H"株8代抗卡那霉素的再生植株。

6、经态特征，确定抗性药苗和敏感苗。抗药性苗有子叶)GEP测定，表明EF$7EG和8F$7EG基因已被整和*!片真叶，叶色鲜绿，根系发达，白色，有根毛。合到其中!!株的基因组中。由*)株GEP测定阳敏感苗无子叶或仅有子叶，叶色泛黄，只有*条根，!［收稿日期］!)))7*)7*C［基金项目］国家自然科学基金资助项目（I"LC)HDD）；陕西省科技攻关项目（"LW)L7X*7)I）万方数据［作者简介］商鸿生（*"H)Y），男，辽宁大连人，教授，博士生导师。主要从事植物病理学教学和研究。第(期!$商#鸿生等褐色，短而无根毛。植株严重矮化。!"#对$%&的抗病性鉴定’结果与分析供试植物材料在防

7、虫温室（’’’()，光照!*+／,）中盆栽，在*叶期用常规方法摩擦接种黄瓜花叶’"!转基因线辣椒自交后代测定病毒山东株系（病毒质量浓度’-／/0），然后仍置供试2代纯合体的2，2和2自交群体，播!.!’1#于防虫温室中培养。接种后’(,记载病株数和严种于含1--／/0卡那霉素的%3培养基上，测定!.重度。严重度分(级，分级标准为：-级，无任何症抗卡那霉素基因的表达。结果(!*个植株中仅#株状；!级，心叶明脉，少数叶片轻微花叶；’级，轻度系敏感，其余生长正常，抗卡那霉素