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1、研究生实验技能培训－－化学分析常用仪器介绍实验中心谭炳炎Waters1525高效液相色谱仪工作原理储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内。由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。仪器组成（主要技术参数）1.高压泵恒压泵；恒流泵2.层析柱及其填
2、充进样器；柱管；层析柱的填充（干装法、半干装法、浆装法）3.紫外光检测器固定波长型；可变波长型；扫描型储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪（柱温箱、二极管阵列检测器）种类：分析型制备型基本概念和术语色谱图和峰参数色谱图基线噪音漂移色谱峰拖尾因子峰底峰高半峰宽标准偏差峰面积峰面积主要用途有机化合物的定性定量分析，尤其是沸点较高和热稳定性较差的化合物，如染料农药、药物、生物碱、核酸、石油产品，高分子化合物及其中间体等。也适合中药、功能食品等产品中有效成分含量特征分布图谱的建立。广泛应用到生物化学、
3、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱对于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物的分离尤为有利。如氨基酸、多肽、蛋白质、生物碱、核酸、甾体、类脂、维生素、抗菌素等均可进行分离分析定量。应用实例复方解热镇痛片的分析维生素类药物的分析激素类药物的分离生物碱的分析核苷与核苷酸的分离鉴定定性、定量分析1.定性：色谱鉴定法（纯物质对照法）非色谱法定性（化学定性方法，两谱联用法定性）2.定量分析：外标法；内标法；内加法；归一化法高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重
4、要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等。液相色谱-红外光谱连用也发展很快,如在环境污染分析测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使环境污染分析得到新的发展。实验须知样品处理：自备试剂：结果分析：常见故障故障1流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purge键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅
5、地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理办法(1)过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可。(2)如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中。(3)打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右，即可将过滤器清洗干净。(4)关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。故障2柱压高原因(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内(2)样品污染沉积。处理办法(1)对于第一种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提
6、高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟。(2)对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。故障3既无压力指示,又无液体流过原因(1)泵密封垫圈磨损(2)大量气泡进入泵体。处理办法对于第一种情况,更换密封垫圈对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助
7、抽出空气。故障4压力波动大,流量不稳定原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理办法工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗.故障5出峰不佳，峰分叉原因(1)色谱柱被污染(2)柱头填料塌陷。处理办法对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后
8、用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。故障6峰面积重复性不佳。原因(1)进样阀漏液(2)加样针不到位处理办法对于第一种情况更换进样阀垫圈(2
