奶牛结核病实验室诊断技术研究进展

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1、奶牛结核病实验室诊断技术研究进展牛结核病(BovineTuberculosis)是由牛分枝杆菌引起的…种慢性传染病。该病传染性强，且能通过奶制品传染给人和其他动物，危害严重，被世界动物卫生组织(OIE)列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。牛结核病的诊断大体上可归为两类：一是临床症状诊断；二是实验室诊断，包括细菌学检测，如涂片镜检、细菌培养、动物实验等；免疫学检测；分子生物学诊断技术等。传统的细菌学方法由于繁琐费时、检出率低、灵敏度差，已不能满足半前疫病诊断的需要。目前世界各国都在致力于研究开发牛结核病的快速诊断方法，并已经建立了一些快速、准确、可靠的新型检测技术，右些技术已经在生

2、产实践中得到了广泛的应用。1细菌学检测细菌学检查的方法有涂片镜检、细菌培养等。临床上样品中的牛分枝杆菌可通过涂片抗酸染色、镜检并通过细菌培养做出确认。涂片抗酸染色法所需材料、设备简单，操作方法简便，是较为普遍应用的方法。由于此法检出的细菌只能说明有抗酸杆菌存在，而月.也不能准确地鉴定出结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌，因此，其缺乏特异性。细菌培养需在37C培养48周才可生长。菌落形态粗糙，中心隆起，周围大而边缘不规则，菌落颜色微白。细菌培养法到目前为止仍被认为是确诊结核的黄金标准。但牛结核分枝杆菌生长缓慢，有1%2脚勺病例结核菌培养失败。同时由于各种条件的影响，阳性率较难提高。2血清学检测2

3、1传统的结核菌素皮内变态反应（OTPPD）CT是老式皮内变态反应，IPD是目前公认最有效的方法，也是被世界动物卫生组织（OIE确定的法定检疫方法，被世界各国接受和采用的方法。它主要是用提纯的PPD进行牛皮内接种，于72~9创、时后观察有无热、痛、肿胀等反应，对可疑的牛需60d后再次复检。该方法检出率和准确率都比较高。PPD作为皮肤试验最大的缺点就是易呈现假阳性和假阴性反应。当感染副结核分枝杆菌等环境分枝杆菌时则可能呈现假阳性反应，即电中大多数蛋白质与其他分枝杆菌和一些无关细菌的相同。对因感染其他分枝杆菌而致敏的动物没有特异性，不能判断病情，而且B33疫苗中含有与FPD相同的抗原成分，因而

4、PPD皮内试验不能鉴别是免疫动物还是感染动物。在一些国家，使用比较结核菌素试验（即比较皮内试验，singleintradermalccmparativetuberculintestSICTD,在颈部一侧的不同部位，同时注射牛型PPD和禽型PPD以判断动物对两种PPD的不同反应，能够提示被检动物是被牛分枝杆菌感染还是非特异的DIH反应。所以，以PPD为诊断工具的1S1反应很难将结核菌显性感染和隐性感染以及BCG免疫的个体区分开来。22酶联免疫吸附试验（ELISA）此类方法均是利用抗原抗体反应检测针对牛结核分枝杆菌抗原的循环抗体。目前用于检测的抗原有JTOESAT-6.CFP10.NPB59

5、.NPB64NPB7dNPB80.NPB83,Ag85.讪（脂阿拉伯甘露聚糖）、LPS（脂多糖）等。ELI弘中也可以采用免疫过氧化物酶，这种方法与传统ELISA法相比，检测速度更快、成本更低、操作更简便。23Y千扰素试验将试验牛血样的淋巴细胞加入特异性PPD一起孵育1424h由于致敏的淋巴细胞能够释放出扰素，因此可用INF-yTELISA进行怎量测怎。通过对结核杆菌和非结核分枝杆菌分了生物学的研究表明ES征遥白仅存在于结核杆菌复合体及少数致病性分枝杆菌中，9阳上的分枝杆菌不具有ESAP6蛋白，因而将ESAA6蛋白作为刺激抗原来检测释放到血中的INI水平是诊断牛结核病的较好方法。免疫学试验

6、证明在ESAIY蛋白上存在着T细胞和B细胞抗原表位，能够诱导强的细胞免疫和体液免疫应答，这极大地推动了以ES心作为诊断试剂的研究价值。Y干扰素试验优于结核菌素试验的一个特点就是，即使动物体内抗原很少也能被检出，且可重复检查。由于接种了BCG使PPD试验很难对结核分枝杆菌的感染做出诊断，因此，迫切需要建立一个新的细胞免疫应答的检测方法，而全血IFH检测方法很有可能成为替代传统的结核菌素皮肤试验的结核病临床辅助诊断方法。1990年，Wood等建立了一种快速诊断牛分枝杆菌致病的细胞因子（1心）检测方法，即在体外用结核菌素或牛型分枝杆菌来源的PPD刺激全血，检测释放到血中的INH水平，因此显著提

7、高了检测家畜牛分枝杆菌感染的敏感性。1991年澳大利亚动物健康委员会将该法确定为检测牛分枝杆菌的正式实验方法。1994年该实验系统被进一步修改，可川于诊断牛分枝杆菌和禽分枝杆菌感染，并且证明该法可用于区分这两种感染。综上所述，由于全血INI水平对结核分枝杆菌感染的检测具有高度的敏感性和特界性，因此该技术为结核病的早期诊断并尽快实施化疗提0£了新的方法o10倍稀释的全血IMT检测实验，不但能够用于不同人群对特异性抗原产生免疫应答的监测