细胞培养II室生物安全标准操作规程

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1、细胞培养II室生物安全标准操作规程第一部分细胞培养II室生物安全总体要求1.目的为规范细胞培养II室微生物安全操作，保障实验室生物安全，以保证实验室人员的安全及实验室环境不被污染。2.适用范围适用于中心细胞培养II室安全操作过程。3.要求3.1实验人员进入实验室开展的实验项目应先填写《二院临床研究中心细胞培养II室申请表》。经导师以及中心批准后进行相关培训，培训合格后方可进入实验室开展工作。3.2每次进行实验前均需提前预订。3.3实验室内禁止从事与实验无关的活动，实验室的门应始终处于闭合状态。3.4工作人员不得留长指甲

2、，不得戴戒指、手镯或其它易降低防护用品防护效果的饰物。3.5实验室内禁止存放非实验物品或氏期不使用的储备实验物品。3.6本实验室可操作病毒类型为载体类病毒（符合BSL-2标准），所有致病性病原微生物操作均不能在本实验室进行。3.7个人防护在实验室工作时必须使用个体防护製备。个人衣服和普通实验服不能穿入细胞培养II室工作区域。实验室内不得穿氏摆裙，短裙及短裤；不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。实验室内严禁处理和配戴眼镜。严禁穿着细胞培养TT室专用防护服离开实验室。发生手套破损应立即更换。3.8操作规范细胞培养TT室包括缓冲区

3、和核心操作区。只有密封在已消毒过的容器中的污染材料才可拿到缓冲区；核心操作区中方可操作病毒。任何有活性的病毒的操作都应在II级生物安全柜中进行。开放式的实验台不允许操作此类病毒。实验室应保持整洁干净。只有当前正在使用的仪器和物品才可放在实验台上。耗材应贮存在指定的箱子里，随用随取。注射器和针头只有在绝对需要时才可使用。用过的针头必须放到专用的利器盒中。应使用塑料器材，玻璃制品只有实验步骤中需要才可使用（比如使用显微或苯酚玻片）。必须使用带滤芯的吸头和吸管。所有的管子、瓶子和培养板等必须要标记清楚，而且只能放到细胞培养I

4、I室屮的培养箱、冰箱或冰和中。有活性的病毒除非经实验室负责人许可（如：为了运输标本的需要），否则不许拿出细胞培养11室。任何情况下书籍和实验记录本都不允许带入细胞实验室II。第二部分细胞培养II室人员进出准则1.目的制定细胞培养II室人员进出的标准操作程序，保障实验室生物安全。2.适用范适用于细胞培养11室人员进出程序。3.规程要求3.1进入程序穿上鞋套后方可进入缓冲间，随后戴帽子、戴口罩、戴手套（工作服袖口应扎在手套内）；进入工作间进行操作，必须穿上防护服才能进行操作。可再戴上一层手套（防护服袖口也应扎在手套内）。3

5、.2退岀程序退出工作间时，摘掉最外层手套，将里面朝外，放入高压灭菌袋中；脱掉防护服，悬挂在指定位置，每周消毒一次；如有病毒液污染防护服，立即更换新的防护服，并将污染位置用10%消毒液进行擦拭，随后置入高压灭菌袋中；摘下帽了和口罩，放入高压灭菌袋中。退出缓冲间时，摘掉鞋套和内层手套，放入指定垃圾袋中；将细胞培养TT室入口门关好。第三部分细胞培养II室使用标准规程1.目的确保细胞培养11室环境的无菌状态，特制定本规程。适用范2.适用于无菌间空气微生物监测。3.过程要求开始工作前，工作间和生物安全柜的紫外照射30分钟，然后生

6、物安全柜至少先运转15分钟。先用70%酒精擦拭生物安全柜的四壁以及台面，然后再把实验用品放到柜里。生物安全柜中只摆放木次实验必需的材料及用品。为避免交叉污染，实验室用品拿入生物安全和以前要用70%酒精进行表面消毒。在实验结束时，包括仪器设备、样本和试剂在内的生物安全柜里的所有物品都应清除表而污染，随后将物品移出安全柜。工作结束后要用70%酒精擦拭生物安全和的四壁及台面。紫外线照射消毒1小时（1小时后自动切断）以强化消毒效果。同吋工作间紫外照射消毒1小吋。每月应对无菌间进行一次无菌检查记录。第四部分细胞培养II室消毒标准

7、操作规范1.目的保护细胞培养II室的生物安全。2.适用范围实验室H常清洁，实验过程屮产生的污染废弃物、使用过的防护装备及设施设备等的消毒。3.过程要求实验室工作人员做好个人防护。穿好工作服、戴好手套、口罩和帽子等。预防性消毒：用70%酒精擦拭待消毒对象，作用15分钟以上。溢出污染：用吸水纸巾覆盖并吸收溢出物，向纸巾上倾倒适当的10%消毒液（有效氯浓度为5000mg/L）,使其覆盖周围区域。使用消毒剂吋，应从溢出区域的外围开始，向中心进行处理。作用时间30分钟以上。操作过程中，凡是接触过病毒的移液管、巴氏吸管和枪头的内壁

8、外壁一定耍用10%消毒液处理后，再丢入垃圾收集器屮；包装移液管的纸套和巴氏吸管的外套请作为固体垃圾放入垃圾袋中并向垃圾袋中喷洒10%消毒液。实验结束后将所有垃圾放置到垃圾袋中，并向垃圾袋中喷洒10%消毒液。每周两次将同体垃圾进行高压灭菌O细胞培养II室安全使用声明本人已认真阅读临床研究中心的各项规章制度和《细胞培养TT室生物安全标