探究盐水对菠萝中菠萝蛋白酶活性的影响

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1、探究盐水对菠萝中菠萝蛋白酶活性的影响探究盐水对菠萝屮菠萝蛋门酶活性的影响一.实验目的1.了解并解释食用菠萝前用食盐水浸泡的原理2.掌握从菠萝中提取菠萝蛋口酶的方法3.掌握测量菠萝蛋白酚活性的方法二.实验原理菠萝蛋口酶是一种具有消炎，抗水肿作川的疏基酶，能分解蛋门质、酯和駄胺。菠萝蛋白酶一般从菠萝汁或菠萝废皮中提取，为浅黄色无定形粉末，分了量33000,微有异臭，微溶于水，不溶于乙醉、丙酮、氯仿，乙瞇，等电点9.55o本实验先从新鲜的菠萝汁中使用有机酸（单宁）沉淀法提取出菠萝蛋白酚，然后通过考马斯亮蓝法测定酶制品屮波萝蛋白酶的总量，最后菠萝蛋白酶将酪蛋白水解产

2、生酪氨酸，通过在275nm波长下测定吸光度的变化，可以测得菠萝蛋白酶的活力。三.实验髀材与试剂1、实验材料新鲜菠萝（自备）、0.lmg/ml牛血清蛋白2、实验试剂柠檬酸钠维生素单宁溶液氯化钠溶液酪蛋口溶液氧氧化钠溶液磷酸缓冲液（溶解磷酸二氢钾，加氢氧化钾调PH至7.0）激活剂（PH7.0,0.05mol/L磷酸缓冲液，内含15mmol/L硫代硫酸钠和6nunol/LEDTA-2Na,现配现用）研钵；离心机；紫外可见分光光度计（lcni石英比色皿）；恒温水浴锅（37°C）；试管、试管架；烧杯、容量瓶；移液管；四.实验步骤（一）预处理菠萝编号123菠萝100g1

3、00g100glmol/LNaO100mlO-Smol/LNad100mlO.lmol/LNaCl100ml蒸憎水处理时间30min30min30min（二）从菠萝中提取菠萝蛋白酶1.将处理过后的波萝切成小块，和适量柠檬酸钠一起放入研钵研成匀浆。2.过滤后2000r/min,离心7mino取上清液3・加Vc,0.2%单宁溶液搅拌15min,静置40min4200r/min,5min离心。弃上清液3.力DlOOrnlO.1%EDTA溶液,200ml1.5%氯化钠液。4200r/min,5min离心。4.加适量1.5%氯化钠溶液，4000r/min,7min离心

4、。得酶沉淀。（三）考马斯亮蓝法测定酶制品中蛋白酶含量已测得标准曲线为y二6.2357x（y为吸光度，x为蛋白酶质量）（四）波萝蛋门酶活力的测定1、取酶制品溶解于0.05mol/L磷酸缓冲液（PH7.0）至10ml,离心得上清液;2、取4支试管，分别标号1、2、34,各加lml溶液酶和0.9m激活剂；3、另取4支试管，分别对应标号1'、2，、3，、4，，各加lml缓冲液和0.9ml激活剂；4、将8支试管置于37°C水浴；5、分别加入0.6ml1%酪蛋白混匀6、37°C水浴下反应10min;7、向8支试管中各加入8m1lmol/L的氢氧化钠溶液,摇匀,于室温放置

5、30min;8、取各自対应的试管为空白调零衣275nm波长下测定吸光度123吸光度275nm0.0710.0590.054一.数据处理由线性关系y=6.2357x,（y为吸光度，x为蛋白酶质量）可以计算酶制品屮蛋白酶的总质量及其他参数（详情见下表）菠萝蛋白酶活力二吸光度/10比活力二蛋白酶活力/蛋白酶质量试管号123蛋白酶质Mmg0.01140,00950.0087菠萝蛋白酶活力U0.00710.00590.0054比活力U/mg0.62280.62110.6207二.分析与讨论从上述结果可知菠萝蛋门酶的比活力较低，可能的原因有：1、所加入的有机酸单宁的量对

6、菠萝蛋白酶沉淀有的影响；2、在实验中是否把单宁溶液弄混而导致菠萝蛋白酶很少沉淀析出；3、菠萝蛋白酶对热不稳定，试验中温度的控制是否合理；4、在活力测定的步骤中所加入的酪蛋白的量不足，导致结果偏低；5、活力测定屮，曲于操作不当，导致部分沉淀溶解在了上清液中，溶液微浑浊，対吸光度的测定有影响从本实验可以看出，在其他条件一致的情况下不同氯化钠浓度的溶液会对菠萝中菠萝酶的活性有影响，冃成负相关关系。菠萝中含有的菠萝酶町能对人体造成过敏反应。盐水的浸泡可以减少菠萝酶的活性已达到减小人体过放反应的效果。