2-1 微生物的实验室培养

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1、专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养一、基础知识(一)微生物:1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.2.微生物包括五类病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界(二)培养基1.分类(按物理形态分)(1)液体培养基(2)固体培养基常用的固体培养基:琼脂固体培养基.微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落.2.培养基内所含的基本物质(1)水:(2)碳源(3)氮源(4)无机盐(1)p

2、H值如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性(2)特殊营养物质如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素(3)氧气的含量如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件3.培养基内所需的其他条件练习(三)无菌技术1、获得纯净培养物的关键:2、无菌技术包括的四大方面(参看教材15页)3、消毒与灭菌(1)消毒：概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物方法:煮沸消毒法巴氏消毒法:如牛奶的消毒化学药剂消毒:酒精、氯气等紫外线或石碳酸、煤酚皂溶液等化学药剂消毒（实验室中）防止外来杂菌的入侵(不包括芽孢和孢

3、子)（2）灭菌概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子方法：灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌微生物的接种工具(接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧灼烧灭菌干热灭菌160－70℃1－2h能耐高温的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高压蒸汽灭菌100kPa121℃15-30min通常用于培养基的灭菌二.实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算－称量－溶化－灭菌－倒平板（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法（三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养1

4、2h和24h后，观察并记录三、课题延伸：菌种的保藏1、临时保藏2、甘油保藏练习倒平板讨论:(1).培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。(2).为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(3).平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以

5、防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(4).在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。1、平板划线法(1).为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接

6、来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。(2).在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。(3).在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。讨论:2.稀释涂布法:(1)系

7、列稀释操作:讨论:编号为的浓度是的多少倍?提示:为倍.105101104涂布平板操作讨论:涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。返回菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。不同的细菌的菌落特征不同菌落是鉴定菌种的重要依据。(2)碳源可作为碳源的物质有:含碳

8、无机物:碳酸盐、碳酸氢盐含碳有机物：不同微生物所利用的碳源不同异养型微生物的碳源为含碳有机物自养型微生物的碳源为含碳无机物糖类（主要）蛋白质脂肪核酸返回(3)氮源可作为氮源的物质有:含氮无机物：氮气、硝酸盐、氨盐含氮有机物：固氮微生物所利用的氮源是游离氮糖类（主要）蛋白质脂肪核酸返回练习1（多项选择）1