淋巴细胞亚群分析

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1、淋巴细胞亚群分析（一）双色分析方案CD45-FITC/CD14-PE;CD3-TC-CD4-PE-CD8-FITC;CD3-FITC/CD（l6+56）-PE;CD19-TC;Cal-Lyse;ControlIgG2a-FPTo结果见表2-3-1o（二）三色分析方案表2-3-1双色法检测外周血T细胞、B细胞、NK细胞试剂组合管号FITCPE应用12345CD45CD3CD3CD3CD3CD14CD19CD4CD8CD16和CD56光散射坐标设门总T和B淋巴细胞总T和CD4阳性T淋巴细胞总T和CD8阳性T淋巴细胞总T和NK细胞A管：CD45/CD14确定FSC/S

2、SC中淋巴细胞“门”位置，对于自配溶血剂用户必做此质控管。B管：阴性对照管，用来设置各PMT电压和阴性区域。C管：CD3/CD4/CD8三色检测管，调节荧光补偿之用。D管：CD3/CD(16+56)/CD19三色检测管。结果见表2-3-2o表2・3・2三色法检测外周血T细胞、B细胞、NK细胞的试剂组合管号FITCPE应用123CD45CD8CD3CD14CD4CD16和CD56光散射坐标设“门”总T细胞及其亚群NK细胞及B细胞CD45和CD14在口细胞上有着不同的表达。它们可以用來在光散射坐标上区分淋巴细胞群体或其他细胞。一个适合的分型方案应能够提供最精确的方法

3、，明确地区分出各类细胞群。方案中所选抗体应能够最大限度地反映出整个标本中细胞的信息，提供样本管Z间的对比质控来作阳性标本荧光强度对照。美国疾病控制中心(CDC)制定了一套检测T淋巴细胞亚群的方案，可作为参照来检测样木。(三)应用CD3/CD19区分T淋巴细胞和B淋巴细胞在多色免疫分型的细胞分型中，阴性细胞群体不仅用来区分阳性细胞群体，它还可以从双阳性细胞屮区分出单阳性细胞。有鉴于此，简单的同型对照细胞并不能完全作为设定荧光阳性界线的参考细胞群。在CDC推荐的淋巴细胞分型方案中，对照细胞群体运用的是相互没有交叉的T、B淋巴细胞。(1)CD3是T细胞特异性抗原，CD

4、19则可用来识别B细胞。如运用CD3/CD19双标试剂，应没有CD3和CD19双阳性细胞群体存在。因此，当运用CD3/CD19双染色时，只会出现单阳性细胞，通过此管可设定机器设置，为后续要观察双阳性细胞的检测管作对照。(2)CD3、CD19阳性表达为独立的阳性细胞群体。如出现双阳性细胞均视为假象。这样就可不用同型对照来设定阴性或阳性界线。其屮单阳性细胞群体提供了设定阳性界线的标准。此外，在CD3/CD19检测时，还会有双阴性细胞群体的存在，这些是NK细胞。这些细胞乂提供双阴性群体的对照。有吋检测吋会出现双阳性细胞，这是由于T细胞和B细胞黏附时同时通过仪器的检测区

5、而造成的双阳性结果。(1)CD3/CD19不仅可用來设定标木的荧光的阴性和阳性界线，它还可用来检查仪器的补偿设置和非特异性结合。在用这个组合进行检测时，会出现三群彼此独立的细胞群，如细胞分群不清或位置发生偏差则要对样本进行仔细分析。(三)应用CD3/CD4来鉴定CD4+T淋巴细胞如同其他许多单克隆抗体一样，抗CD4抗体并不是完全只与辅助/诱导性T细胞发生反应，它还会与单核细胞结合。因此，如要鉴别CD4+的辅助/诱导性T细胞，则需要加入第二种抗体来区分辅助/诱导性T细胞与单核细胞。⑴首先用CD3来区分全部T细胞。CD3/CD4双阳性的细胞为真正的辅助/诱导性T细胞

6、。这些细胞主要是HIV病毒感染对象。在HIV感染后，随着疾病的发展出现免疫抑制后，这群细胞会明显减少;在临床中，对HIV的监测主要依靠检测这群细胞的数量。(2)CD3・/CD4+细胞群体是由单核细胞组成的。这些细胞和对于CD4+和T细胞来说弱表达CD4,在光散射参数的位置分布也较广。CD3/CD4抗体组合能完全将CD4阳性辅助/诱导性T细胞与CD4阳性的单核细胞区分开来。因为CD4+T细胞能与单核细胞完全分离，故在光散射坐标上设淋巴细胞“门”时，“门”可设得大一些，即使包含了单核细胞或其他细胞都不会影响检测值。(3)此管也可检测补偿及非特异性结合情况°CD3+/

7、CD牛细胞群体应明显地与CD3/CD19中CD3+细胞群位置相重合。(三)应用CD3/CD8鉴定CD8+T淋巴细胞CDS的表达不只限于细胞毒性/抑制性T细胞，这种抗原在部分NK细胞上也能检测到，故CD8必须与CD3一起来鉴定细胞毒性/抑制性T细胞。(1)同时表达CD3/CD8的细胞群才是真正的CD8+T淋巴细胞，CD8的表达包括弱阳性和强阳性部分。CD8的表达经常与阴性细胞群体相延续。因此，CD8阳性细胞检测群依赖于仪器灵敏度，正确补偿的建立，以及恰当地设定阴性细胞群体。CD3-/CD84-细胞包括一部分NK细胞和少数粒细胞。这些细胞弱表达CD8+,由于缺少CD

8、3,易于与CD3+/CD