沙门氏菌的检验

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1、沙门氏菌的检验2.2恒温培养箱：36°C±1°C,42°C±1°C。2.3均质器。2.4振荡器。2.5天平：感量0.1g。2.6无菌锥形瓶:容量500mL,250mL。2.7无菌吸管:ImL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。2.8无菌培养皿：直径90mm。2.9无菌试管：3mmx50mm、10mm><75mmo2.10无菌毛细管。2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。3培养基和试剂3.1缓冲蛋白豚水(BPW):见附录A中A.1。3.2四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液：见附录A中A.2。3.3亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液：见附录A

2、中A.3。3.4亚硫酸钮(BS)琼脂：见附录A屮A.4。3.5HE琼脂：见附录A中A.5。3.6木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂：见附录A中A.6。3.8三糖铁(TSI)琼脂：见附录A中A.7o3.9蛋口腺水、靛基质试剂：见附录A中A.8。3.10尿素琼脂(pH7.2):见附录A屮A.9。3.11亂化钾(KCN)培养茶：见附录A中A.IOo3.12赖氨酸脱竣酶试验培养基：见附录A中A.llo3.13糖发酵管：见附录A中A.12o3.14邻硝基酚卩・D半乳糖井(ONPG)培养基：见附录A«

3、«A.13o3.15半固体琼脂:见附录A中A.14。3.16丙二酸钠培养基:见附

4、录A中A.15o1前增称取25g(mL)样品放入盛^*225mLBPW的无菌均质杯小，以8000r/min〜10000r/min均质1min〜2min,或置于盛冇225mLBPW的无菌均质袋中，川打

5、击式均质器拍打1min〜2mine2增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取ImL,转种于10mLTTB内，于42°C±1°C培养18h〜24ho同时，另取ImL,转种于lOmLSC内，于36°C±1°C培养18h〜24h。3分离分别用接种坏取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板(或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。于36°C±1°C分别培养18

6、h〜24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或40h〜48h(BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。IIE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或儿乎全黑色；有些菌株为黄色,中心黑色或儿乎全黑色。XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；冇些菌株为•黄色菌落，带或不带黑色中心沙门

7、氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。4生化试验(1)自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要火菌，肓接接种赖氨酸脱竣酶试验培养基和营养琼脂平板，于36°C±1°C培养18h〜24h,必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱竣陆试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2o表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养基内的反应结果三糖饮琼脂赖氮酸脱竣酶试验培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA+(-)十(-)+可疑沙门氏菌KA+(・)+(-)-可疑沙门氏菌属AA+(-)+(-)+可疑沙门氏菌AA

8、+/—+/—-非沙门氏菌KK+/—+/—+/-非沙门氏菌注：K：产碱,A：产酸;+：阳性，一：阴性；+(-):多数阳性,少数阴性;+/-：阳性或阴性(2)接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养基的同时，可肓接接种蛋白月东水(供做靛基质试验)、丿呆索琼脂(pH7.2)、氧化钾(KCN)培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36°C±1°C培养18h〜24h,必要时可延长至48h,按表3判定结果。表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表反应序号硫化氢(H2S)靛基质pH7.2尿素氤化钾(KCN)赖氨酸脱竣酶A1+---+A2++--+A3----+/・注：

9、+阳性；一阴性；+/—阳性或阴性。反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氮酸脱竣酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如冇2项异常为非沙门氏菌。表4沙门氏菌崽生化反应初步鉴别表pH7.2咏索占.「：”KC?；判定结果——甲型副估裁沙门氏蘭（要，求学整定结果—+沙门氏蕩IV或V（•要求符件本屏生化特性）+一+汐门氏ft个别V体＜要求血清*签定结果）注，+我示阳性；+盘示阴性.反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应序号A3：补做ONPG。ONPG阴