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1、脂肪间充质干细胞探究进展及临床展望【关键词】干细胞1引言目前干细胞的来源主要有两种，即胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESC)和成体干细胞(adultstecells,ASC)oESC由于涉及伦理道德及对其分化能力控制等各方面问题，目前各国对ESC研究普遍持谨慎态度；而ASC存在取材困难，获得率低(约1X105骨髓间质细胞方能获取一个间充质干细胞)［1］等不利因素其临床应用前景也明显受到限制。在此情况下，人们从人脂肪组织抽吸物中获得了一种成纤维细胞形态的细胞群［2］,具有取材容易，获得率高，自我更新能力与多向分化潜能类似ASC等优势，因而有望成为组织工程和基因工程中新
2、的干细胞来源，并且具有较好的临床应用前景。2PLA细胞简介2.1PLA细胞的发现近年来发现，脂肪组织可分泌多种激素样物质，对机体内分泌环境具有调节作用，脂肪组织已不再是一个简单、被动的能量贮存场所，应作为重要的内分泌器官来进行研究［3］。由于干细胞研究中已发现越来越多的器官或组织分离出ASC,如神经干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、肌肉干细胞、成骨干细胞、皮肤干细胞［4］等，而脂肪组织与骨髓组织一样均在胚胎发育过程中源自中胚层，因此能否从脂肪组织中有效分离出干细胞成为研究目的。2001年，Zuk等［2］以外科切除或吸脂方式获得人或大鼠的脂肪组织作为研究对象，按照Katz等［5］的干
3、细胞分离方法，消化离心等单位处理脂肪组织后获得一个显微镜下呈成纤维细胞形态的细胞群，体外培养过程中发现该细胞群具有稳定的倍增效应和低衰老性，且能够向多种细胞类型分化，与干细胞所特有的多向分化潜能及自我复制能力等基本特征一致，命名为脂肪组织提取细胞(processdelipoaspiratecells,PLA细胞)。原代培养贴壁的细胞较少，传代后的细胞称为脂肪源性成熟基质细胞(adiposderivedadulestromal,ADAS)o2.2形态和生长特点ADAS细胞呈平行排列，漩涡样生长,细胞为梭形，胞浆和核仁丰富。传代培养中，经过多次传代(10〜20代)，细胞的增殖速度无明显减慢
4、，衰老和死亡细胞所占比例也很少。这表明脂肪组织蕴含丰富的ADAS细胞，且细胞体外扩增能力很强，易于传代培养［6］。2.3免疫表型用流式细胞仪和免疫组化方法研究发现，体外培养的ADAS细胞可表达如下蛋白。a)粘附分子:ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素B1(CD29)和a4(CD49d)；细胞间粘附分子1(ICAM1,CD54)、endoglin(cdl02).血管细胞粘附分子(VCAM,CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM,CD166)o但不表达神经细胞粘附分子(NCAM,CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM3,CD50)、整合素ab(CDllb
5、)和B2(CD18)及内皮选择蛋白(Eselectin,CD62)；b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体；c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成I和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin、Thy1(CD90)和MUC18(CD146)；d)肌蛋白:能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达造血细胞标志物CD14、CD31或CD45；f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白；g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLAABC,而不表达类蛋白HLADRO不同的试验结果结果有不同，但这种差异可能是在细胞分
6、离、培养、纯正化方法不同，以及免疫组化技术和流式细胞仪敏感性的不同而造成。总的来说，PAL细胞的免疫表型与已经报道的骨髓间充质干细胞是相似的[7]。2.4PLA细胞与充质干细胞(mesenchymalcell,MSC)的比较脂肪组织与骨髓在胚胎发育过程中均源自中胚层，因而有学者对PLA细胞与骨髓来源的MSC在细胞形态、生长动力学、多向分化能力、细胞衰老性等各方面进行了比较，结果发现二者差异仅表现在以下几个方面［8］：Q来源及获取方式。MSC需要骨髓穿刺，经密度梯度离心方法获得，量较少；而PLA细胞来自脂肪组织抽吸物，简单消化离心等步骤即可获取，量较大；b)细胞表面抗原。MSC与PLA细
7、胞在细胞表面表达的CD抗原大体一致，但表达的细胞黏附分子略有不同［9］；c)体外培养方式。MSC体外培养时，血清质量与来源对其生长和增殖有较大影响［10］,但PLA细胞体外增殖和分化时并不需要添加特殊血清。3PLA细胞的多向分化潜能PLA细胞的获取与分化培养方法简单易行。外科手术或抽脂术获取脂肪组织后，参照Katz等［5］方法获得PLA细胞,整个分离过程仅耗时2h,且获得量较大，300mL脂肪抽吸物中一般均可得到2X106〜6X106个PLA细
