DB441900 T 06-2006 东莞香蕉脱毒组培苗质量标准

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1、ICS67.080B31DB441900广东省质量技术监督局备案号：376—2006广东省东莞市农业地方标准DB441900/T06—2006东莞香蕉脱毒组培苗质量标准2006-05-10发布2006-09-01实施广东省东莞市质量技术监督局发布DB441900/T06—2006前言香蕉组培技术自八十年代获得成功后，由于该技术能保证种质纯正，与传统的吸芽繁殖相比，通过组培苗繁殖具有生长迅速，长势整齐一致，便于生产管理，缩短采收期，病害少，产量增加30%～50%等优点，因而深受广大蕉农的欢迎。但因缺乏一个统一的标准，市场上香蕉脱毒组培苗质量参差不齐，影响了香蕉产量，为确保香

2、蕉脱毒组培苗的质量,规范香蕉脱毒苗市场，特制定本标准。本标准的附录A、附录B、附录C、附录D均为资料性附录。本标准由东莞市农业局提出并归口。本标准起草单位为东莞市生物技术研究所。本标准起草人为：郑健临、陈春满、王方正、王晓宁等。本标准首次发布日期：2006年5月10日。DB441900/T06—2006东莞香蕉脱毒组培苗质量标准1范围本标准的“香蕉”指栽培上广义的“香蕉”，即香芽蕉（亦简称香蕉）、粉蕉、龙牙蕉和大蕉四大类中的香芽蕉。本标准规定了香蕉脱毒苗的定义、分类和分级、质量要求、检验规则和包装、标志、运输与贮存。本标准适用于通过组织培养技术培育不带香蕉花叶心腐病（CM

3、V）和束顶病（BBTV）病毒香蕉脱毒苗的生产。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1脱毒组培瓶苗指通过组织培养技术繁育，并经病毒检测后不带有花叶心腐病和束顶病病毒，在培养瓶中生长且已达假植标准的根、茎、叶俱全的完整香蕉小植株。2.2营养袋（杯）苗香蕉脱毒组培瓶苗分级假植于装有营养土的特定规格营养袋（杯）中，在隔离良好的条件下经精心管理所培育而成的、可出圃供大田定植的香蕉小植株。2.3变异株指与正常植株相比，株型矮化，叶片短圆；或株型纤弱，叶片较细、长，叶面不规则凹凸，叶片扭曲；或叶片部分缺绿呈花叶状等主要特征表现异常的植株。2.4变异率指生产不正常的植株数和总植株

4、的比率。2.5带毒率指经病毒检测后带病毒的植株数占所检植株总数的百分比。1DB441900/T06—20063分类和标记3.1脱毒苗按繁育过程分为香蕉组培瓶苗和营养袋（杯）苗两类。3.2香蕉组培瓶苗按质量要求分为一级、二级和三级三个级别；营养袋（杯）苗按质量要求分为一级、二级和三级三个级别。4质量要求4.1香蕉组培瓶苗的质量要求见表1。表1瓶苗的质量要求指标项目一级二级三级假茎高，cm4.0～4.93.0～3.9≤3.0假茎粗，cm0.30～0.390.25～0.290.25叶片数≥43～4≤3假茎基部颜色绿色或浅绿色绿色或浅绿色绿色或浅绿色变异率，%≤2.02.1～3.

5、03.1～5带毒率0品种纯度，%≥99≥98≥964.2营养杯苗的质量要求见表2。表2营养杯苗的质量要求指标项目一级二级三级假茎高，cm≥4025～4015～25假茎粗，cm≥1.81.2～1.80.6～1.2叶片数13～157～134～6叶色正常变异率，%≤2.02.0～3.03.1～5.0带毒率0品种纯度，%≥99≥96≥955试验方法5.1病毒检测方法5.1.1抗原的制备对照上清的准备：采集香蕉病叶1.0g，加入液体氮冷冻研磨成粉末，加入5.0mL研磨缓冲液，转入10mL离心管，12000rpm，离心5min，取上清。将得到的上清用做抗原和阳性对照。待检测香蕉植株上

6、清的准备：采集需检测香蕉植株的叶片，采用相同方法得到上清，取上清检测待用。5.1.2抗血清的置备鉴定病毒的置备（自己提纯病毒，要求纯度达到95%）：取1.2ug提纯病毒加入10mL福氏不完全佐剂（无水羊毛脂和液体石蜡之比为1︰4）进行完全乳2DB441900/T06—2006化，所得就是抗原，置-20℃保存备用。免疫程序：免疫前对家兔采用耳静脉取血，作为ELISA反应时的阴性对照血清；随后免疫家兔。第一次取2mL乳化抗原（含300ug抗原CP），采用背部多点皮下注射的方法免疫家兔；第一次注射后7d，采用同样的方法和剂量第二次免疫家兔；第二次注射后7d，采用同样的方法和剂量

7、第三次免疫家兔；第三次注射后7d，采用同样的方法和剂量，加强免疫一次；最后一次注射后10d，采用颈动脉采血，收集血液；4℃血液处理及保存将采集的血液于室温放置60min，然后于4℃过夜；将析出的血清取出，于室温4000rpm，离心10min，取上清，加入等体积的甘油，混均后分装；密封，配-20℃保存，这就是抗血清。5.1.3检测取置备的抗原200uL，加入到酶联板，37℃放置2h，倒掉上清液，用力扣干酶联板。然后加入200uL的PBST洗液洗5min，倒掉洗液，用力扣干酶联板，洗板重复三次。加入200uL的封闭液，37℃放置2