DB51 T 921-2009 水稻白叶枯病菌检验鉴定技术规程

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1、65.020.99B19DB51四川省地方标准DB51/T921—2009水稻白叶枯病菌检验鉴定技术规程InspectionandIdentificationRulesofXanthomonasoryzaepv.Oryzae2009-03-05发布2009-03-10实施四川省质量技术监督局发布1DB51/T921—2009目次前言.................................................................................II1范围.........................................

2、.......................................12术语和定义..........................................................................13原理................................................................................144试剂与材料.........................................................................15仪器及用具..

3、........................................................................26取样................................................................................27检验方法............................................................................28结果判断..................................................

4、..........................29除害处理............................................................................3附录A（规范性附录）水稻白叶枯病间接ELISA检验程序..................................4附录B（资料性附录）水稻白叶枯病田间典型症状.........................................6IDB51/T921—2009前言本标准的附录A是规范性附录。本标准的附录B是资料性附录。本标准由四川省农业厅提出并归

5、口。本标准起草单位：四川省农业厅植物检疫站。本标准主要起草人：赵兰鸰、陈素清、帅波、吴志平、李耄、袁曦、万佳IIDB51/T921—2009水稻白叶枯病菌检验鉴定技术规程1范围本标准规定了水稻白叶枯病的取样方法、田间症状识别、实验室检验鉴定技术要求。本标准适用于水稻白叶枯病菌检验和鉴定。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准2.1水稻白叶枯病菌Xanthomonasoryzaepv.oryzae(Ishiyama)Dye)指引起水稻白叶枯病的病原细菌。属黄单胞杆菌属细菌。2.2噬菌体prophage是一种感染细菌和放线菌的病毒，本文特指侵染水稻白叶枯病菌的病毒。2.3噬菌斑plaq

6、ue在培养基的菌苔上出现一个由于细菌被噬菌体裂解后造成的半透明的空斑，称噬菌斑。3原理水稻白叶枯病菌通过带菌种子远距离传播，该病菌属难以很快获得纯培养，且鉴定比较困难。因此，在鉴定时除了进行田间识别外，主要采取用噬菌体检测、血清学的酶联免疫法（ELISA）检测。噬菌体检测其原理是利用噬菌体的寄主专化性，细菌被噬菌体寄生后，细胞壁溶解或破裂，细菌消解，在固体培养基上出现半透明的圆斑－噬菌斑。通过噬菌斑的有无判断被检样品是否带菌。酶联免疫间接法（ELISA）检测的原理是利用水稻白叶枯病抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化反应，形成酶标记的特异性免疫复合物。当碱性磷酸酶标记的免疫复合

7、物与相应底物结合，并催化无色底物生成有色产物，根据显色反应，判断被检样品是否带菌。44试剂与材料除非另有说明，在本标准中使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。4.1ELISA检验4.1.1样品提取液取1.15g磷酸氢二钠（Na2HPO4）、0.2g氯化钾（KCl）、0.2g磷酸二氢钾（KH2PO4）、8g氯化钠（NaCl）、0.2g叠氮化钠（NaN3），用1000mL蒸馏水溶解，并调整pH值到7.4。4.1.2洗涤液取1.15g磷酸氢二钠（Na2HPO