间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

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1、间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体作者：张茂坤指导老师：魏建忠安徽农业大学动物科技学院06动物医学摘要：随着畜禽养殖业规模化、集约化和商品化程度的增高，畜禽流动和引种工作的频繁，一些疾病的发生、发展变的越来越复杂，新的病毒感染性疫病日渐增多。近年来，有些猪场经常发生种公猪种用性能下降，母猪久配不孕，妊娠母猪流产，产死胎；所产仔猪表现高热、呼吸困难、流涎、呕吐、腹泻和痉挛等症状，死亡率较高，造成严重的经济损失。被怀疑为繁殖障碍性疾病，而最可能发生的是猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征。应用ELISA诊断试剂盒对某猪场的59份血清进行了抗体检测，检出阳血清为47份，阳性率为79．66。表

2、明此猪场猪群中存在PRRS和PR的病毒。关建词：猪伪狂犬病；间接ELISA；抗体检测；酶联免疫吸附实验前言：伪狂犬病(Pseudorabies)是由伪狂犬病毒引起的多种家畜和野生动物的一种急性传染病。除猪以外的其他动物发病后通常具有发热、奇痒及脑脊髓炎等典型症状，均为致死性感染，但呈散发形式。猪是伪狂犬病毒的自然宿主和贮存者，仔猪和其他易感动物一旦感染该病，死亡率高达100％，成年母猪和公猪多表现为繁殖障碍以及呼吸道症状。猪的各个生长时期均可感染此病，尤其以仔猪最为严重。本病广泛分布于世界各地。在我国该病也广泛存在，并严重发病，尤其是猪的伪狂犬病，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。

3、病原简介：伪狂犬病毒又名猪疱疹病毒I型，属于疱疹病毒科a-疱疹病毒亚科。病毒粒子为圆形，直径150～180nm，核衣壳直径为105～110nm，呈二十面体对称。病毒粒子的最外层是病毒囊膜，它是由宿主细胞衍生而来的脂质双层结构。囊膜表面有长约8～10nm呈放射状排列的纤突。伪狂犬病毒的毒力由几种基因协同控制，主要包括gE，gD，gI和TK，其中TK基因是最主要的毒力基因。TK基因一旦失活，该病毒对宿主的毒力将明显降低甚至丧失。　　伪狂犬病毒V只有一个血清型，但不同毒株在毒力和生物学特征等方面存在差异。伪狂犬病毒具有泛嗜性，能在多种组织培养细胞内增殖，其中以兔肾和猪肾细胞最为敏感，并引

4、起明显的细胞病变。结构蛋白及其功能迄今为止，在猪伪狂犬病毒中已经发现了ll种糖蛋白，其中除gG是外分泌蛋归之外，其它10种结构蛋白均定位于囊膜上。目前,通过分别构建这些糖蛋白的缺失或插入失活株灾变株的方式，己使人们对这些糖蛋白的功能有了比较全面而深刻的了解，构建缺失突变株也是当今PRV分子生物学研究的热点之一。病毒的非必需糖蛋白gC能诱导中和抗体的产生，同时它对于病毒吸附靶细胞方面发挥重要作用，缺失gC的病毒粒子在侵染靶细胞的过程中会发生进入靶细胞的速度减慢甚至是无效吸附，而gC只有与gE、gI协同起来才能具各生物学活性：另一方面，gC对于病毒的释放过程也起着关键作用。gE与gI以

5、非共价结合的复合体存在，有意义的是，gE中两个氨基酸的缺失会导致病毒毒力太为降低，这使得目前gE成为PRV的一个研究热点：同时，gE通过特异的方式影响病毒的释放。gG尽管与病毒的吸附、穿透以及细胞间的扩散无关，但到目前为止尚未发现任何缺失非必需糖蛋白的野毒株，这表明非必需糖蛋向很可能是病毒粒子在动物体内生存的条件之一。gN大小为14KDa的蛋白质,与病毒的穿透有关,该蛋白与gM一起以二硫键的形式形成复合物，gM对gN在病毒粒子中的存在起辅助作用。在目前已经发现的11种PRV糖蛋白中，各种糖蛋白在诱导免疫应答方面起着重要作用，然就目前为止，对于病毒的复制或病毒毒力的表达在在诱导免疫应

6、答中所起的作用还不甚清楚。目前，通过基因工程的手段构建不同的缺失突变株，并对该系列突变株进行分析发现，不同的基因产物在构成PRV毒力中的作用是不一样的，gB、gC、gE、gI与PRV的毒力关系密切，不过它们仅起参与作用,它们协同决定病毒的毒力。流行病学：　伪狂犬病是由伪狂犬病毒(PseudorabiesVirus,PRV)引起的猪和多种动物共患的一种急性传染病[1]。猪伪狂犬病主要引起仔猪的高死亡率和妊娠母猪的繁殖障碍,流行广泛,一旦传入猪群,将导致巨大的经济损失,且很难根除[2]。伪狂犬病的发生具有一定的季节性，多发生在寒冷的季节，尤其是冬末春初，但其他季节也有发生。该病潜伏期一

7、般为3~6天，最短可为36小时，最长可达10天。伪狂犬病毒在全世界广泛分布。伪狂犬病自然发生于猪、牛、绵羊、犬和猫，另外，多种野生动物、肉食动物也易感。实验动物中家兔最为敏感，小鼠、大鼠、豚鼠等也能感染。关于人感染伪狂犬病毒的报道很少。　　猪是伪狂犬病毒的贮存宿主，病猪、带毒猪以及带毒鼠类为本病重要传染源。该种病毒对外界的抵抗力较强，在污染的猪舍能存活一个多月，在肉中也可存活一周以上。但是该病毒一般需要密切接触才能传染，在集约化的猪场容易爆发该病。一般常用的消毒剂对该