食用菌实验-母种原种扩大培养

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1、实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。超净工作台则要先灭菌20分钟。②双手洗净。打开工作灯

2、，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要

3、远离酒精的火焰，周而复始。一支母种可扩接20—25支试管。贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。7～10天后菌丝就可长满试管。原种30天左右长满。作业：归纳原种和试管种的接种全过程。实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，电热恒温培养箱，接种钩，接种针，酒精灯，搪瓷杯，高锰酸钾，福尔马林，母种试管(18×180mm)，火柴

4、，记号笔，钢笔，标签，工作记录本，250毫升磨口瓶，75％酒精及棉球、95％酒精，升汞。斜面培养基，斜面母种。三、实验步骤与方法1．无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。2．接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。超净工作台则要先起动20分钟(或按说明书操作)。②双手洗净。打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。③左手平托两支试管，拇指按住试管底部

5、，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。经瞬时灼烧后大部分杂菌可被杀死，即使有少数未死者，也被加热固定，不致脱落。操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。⑤用冷却的接种钩，将已长满菌丝培养基划成1平方厘米的方块，钩住接种块，或用接种环轻轻接触菌苔，挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。注意不要使菌苔碰到管壁，取出时，不可使环通过火焰。悬空，迅速伸进待接试管中，将

6、种块置于培养基的中部，在斜面中部触一下，使菌块落在培养基上，注意环要平放，不要划破培养基，也不要使菌苔沾到管壁上。⑥抽出接种环，将两支试管口同时在火焰上灼烧灭菌，烧灼棉塞，分别塞好棉塞。注意不要用试管口去迎棉塞，以免试管在运动时纳入空气造成污染。接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。一支母种可扩接20—25支试管。接种完毕之后，必须马上贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期，以防混淆。母种标签大小为3．5×2cm，原种为4×3cm。均应贴在正面偏上位置，不要影响对菌种的观察。3．菌种培养接好种的试管，放在26--27℃条件下培养，每隔2天检查一

7、次。遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。7～10天后菌丝就可长满试管。菌丝长满试管后要及时取出，放在常温下3～5天，就可作为接种试管母种或制作原种之用。不立即使用的试管母种，放在4℃左右的条件下存放，每隔半年转管一次，可长期保存。实验五原种接种与扩大培养•一、实验目的•通过对接种常规消毒、原种（二级种）接种和扩大培养，基本掌握原种接种操作技能。并培养学生定期检查菌丝生长情况的观察能力和鉴别杂菌污染的形征识别能力。•二、实验材料和用具•接种箱，接种钩