各种表达载体

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1、表达载体一、原核细胞表达载体1.pBAD载体:特点;该表达质粒含有araBAD(arabinose)操纵子的PBAD启动子和编码该启动子的正负调控子基因araC，具有紧密调控功能和高水平表达外源蛋白质的原核细胞表达载体。请注意:1.当要扦入其他信号肽片段，改建此载体时，请不要利用该载体上的Nde1EcoR1BamH1Kpn1和Pst1位点，以免造成重组困难，因为前述内切酶在此载体上均有二个位点，最好使用只有一个酶切位点的Sac1和Hind111位点。同时记住，如在不含任何信号肽的PBAD表达质粒扦入信号肽，其

2、非编码N-末端要包含核糖体结合位点(RBS)核苷酸序列。2在使用含OmpA分泌信号肽的PBAD表达质粒时，请应用OmpA分泌信号肽上的Sac1以及载体Hind111酶切位点，这些在载体序列上都是单个酶切位点。本公司目前有含OmpA分泌信号肽和不含任何信号肽的二种PBAD表达质粒，其多克隆位点区域图谱如下:(a)、含OmpA分泌信号肽的PBAD表达质粒多克隆区域SDPBAD….TACCCGTTTTTTTCC….GCTAGCAGGAGGAAACGATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCAC

3、TGGCTGGTAMAELTTCGCTACCGTAGCCATGGCCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGCCTGCAGGCATCCAAGCTTNco1Sac1Kpn1Smal1BamH1Pst1Hind111(b)、不含分泌信号肽的PBAD表达质粒多克隆区域EcoR1Kpn1BamH1Pst1PBAD….TACCCGTTTTTTTGG….GCTAGCGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGCCTGCAGGCATCCAAGCTTNde1Sac1Smal

4、1Hind111下图显示本公司应用pBAD表达载体完成的实验结果:pBAD载体驱动大分子蛋白质在原核细胞Origami(DE3)内高效表达2.pCAl-n&pCAl-pelB载体特点:该原核细胞表达载体是来源于以T7RNA聚合酶为基础的pET载体，含有T7/LacO启动子、编码钙调素结合多肽标鉴和凝血酶切点的核苷酸序列。因此，该表达载体在E.coliBL21(DE3)或BL21(DE3)pLysS宿主菌中能高水平表达外源蛋白质、且这种表达的外源蛋白质因带有钙调素结合多肽和凝血酶切点，故该蛋白产物易于纯化和产业

5、化。此外，本公司利用分泌信号肽PelB，构建成新型的的原核细胞表达载体Pcal-PelB。此载体表达的蛋白产物能在分泌肽PelB的指引下进入细胞周质。(a).Pcal-nMKRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGALLVPCATATGAAGGGACGATGGAAAAAACAATTTCATAGCCGTCTCAGCAGCCAACCCGCTTTAAGAAAATCTCATCCTCCGGGGCACTTCTGGTTCCNde1RGSPGILDSMGRLELKLRSAGCGTGGATCCCCGGGAATTCTAGA

6、CTCCATGGGTCGACTCGAGCTCAAGCTTAGATCCGCCBamH1Sma1EcoR1Nco1Sal1Xho1Sac1Hnd111(b).Pcal-PelB:Nde1actggagactcatATGAAATACCTATTGCCTACGGCAGCCGCTGGATTGTTATTACTCGCGGCCCAGGGCMKYLLPTAAAGLLLLAAQPNco1Msc1BamH1EcoR1Sal1GCCATGGCCaaggatcctaagtaagtagaattctgagtaggtaagtcgacaatcg

7、cgtctagagccccgacgcgctgggAMA******3.pPOW3.0表达载体特点:该原核表达质粒含有噬菌体的重叠λPRPL热诱导启动子和编码热敏感抑制子的C1857基因，可使宿主细胞在合成蛋白前获得高密度的宿主细菌，进行高水平目的蛋白表达，并对蛋白合成提供紧密控制。PelB分泌信号肽能指引合成的外源蛋白通过胞浆膜进入胞质。特别提示:在进行重组质粒时，最好在N-未端用Nco1或Msc1位点，C-末端则可用BamH1、EcoR1位点进行拼接。图示为启动子、PelB分泌信号肽和多克隆位点区域Xho1

8、λPRPL启动子ggggtgtgtgatacgaaacgaagcattggcgcctcgagtaatttaccaacactactacgttttaactgaaacaaRBSNde1actggagactcatATGAAATACCTATTGCCTACGGCAGCCGCTGGATTGTTATTACTCGCGMKYLLPTAAAGLLLLANco1Msc1BamH1EcoR1Sal1GCCCAGGGCGCCA