高中生物实验1大肠杆菌的培养和分离学案浙科版选修1

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1、大肠杆菌的培养和分离1．微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系？(1)概念内涵：其关系图解见下(2)结构上：三者都是结构简单，形体微小的生物，但是从细胞角度看其结构是不同的，具体如下：2．培养大肠杆菌的LB培养基中有各种物质，为什么选择这些物质，这些物质有什么作用呢？(1)人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质——培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素，即水、无机盐、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质)。见下表：微生

2、物的营养要素定义功能类型化合物类型常用物质碳源凡可构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的营养物质称为碳源构成细胞物质，供给微生物生长发育所需要的能量无机碳(自养型微生物用)无机物CO2、NaHCO3、CaCO3等有机蛋白质、核酸类牛肉膏、蛋碳(异养型微生物用)白胨、花生粉饼、明胶、氨基酸等糖类脂质等葡萄糖、蔗糖、淀粉等氮源凡是构成微生物的细胞物质或代谢产物中氮素来源的营养物质称为氮源主要是提供合成原生质和细胞其他结构的原料，一般不作能源无机氮铵盐NH3、(NH4)2SO4硝酸盐KNO3N2空气有机氮牛肉膏、蛋白胨、醇母膏、尿素、明胶等生长因子一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳

3、、氮源自行合成的所需极微量的有机物一般是酶和核酸的组成成分酵母膏、玉米浆、黄豆饼粉、动植物组织液、麦芽汁等，复合维生素水作用：组成成分；反应介质；物质运输媒体；热的良导体无机盐作用：维持渗透压、pH等(2)大肠杆菌的LB培养基微生物的营养要素本实验中大肠杆菌LB培养基配方培养基配方与微生物营养要素的对应关系LB液体培养基LB固体培养基氮源、碳源、无机盐、生长因子、水琼脂1g蛋白胨0.5g主要提供大肠杆菌的氮源、碳源需求酵母提取物0.25g主要提供生长因子NaCl　0.5g提供无机盐水　50mL提供水(3)此外配方中还要注意pH等。3．该实验中这些操作的原因(1)三角锥形瓶中的LB固体培

4、养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才用来转移和分装，制成固体平面培养基，为什么？你用什么简易方法快速估计该温度？因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂，它在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，当冷却到60℃左右时，不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。简易估计温度的方法：可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶，感觉锥形瓶由烫手转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到60℃左右了。(2)进行恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在盖子上；如果正放培

5、养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的，培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。(3)将大肠杆菌用接种环自斜面转移到液体培养基中培养时，为什么接种环必须先深入到斜面冷却后，才能再取斜面上的菌体？接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌，一直灼烧至红，温度很高，若不冷却就直接用其取斜面上的菌体，菌体可能因为接触高温接种环而死亡，导致大肠杆菌的转移培养失败。(4)用划线法分离大肠杆菌中，第一次和随后的几次划线前都要灼烧接种环，它们的原因一样吗？在划线结束后仍然要灼烧接种环这又

6、是为什么呢？虽然每次灼烧都是为了灭菌，但所灭的菌种和原因却不一样。灼烧接种环的时间消灭的菌体原因第一次划线前其他杂菌防止其他杂菌的侵入而造成污染随后的几次划线前上次划线结束后残留在接种环上的实验菌(本实验为：大肠杆菌)为了使下一次划线时，接种环上的菌来自上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，最终获得单个菌落，实现菌的分离最后一次划线结束后为了防止实验菌残留于接种环而污染环境和感染实验人员(5)用划线法分离大肠杆菌时，每次的划线是怎么样的？对随后的划线的起点有什么要求？为什么这样要求呢？每一次的划线依次的2次划线之间的关系各次划线的分布图形辅助理解划线的

7、要求不能出现线条的重叠第二次以及随后的划线操作，总是从上一次划线的末端开始不要将最后一区的划线与第一区相连这样要求的原因使线条末端细菌的数目比线条起始处要少因为划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到有单个细菌繁殖而来的单菌落若相连，则可能最后一次划线末端处的细菌与第一次的叠加，细菌的数目不是最少的，不能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终将很难获得单