DB22T 1607-2012 化妆品中单核细胞增生李斯特氏菌检测

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1、ICS65.020.30B40备案号：35741-2013DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1607—2012化妆品中单核细胞增生李斯特氏菌检测Detectionoflisteriamonocytogenesincosmetics本标准仅供内部使用不得翻印2012-12-01发布2013-01-01实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1607—2012本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20

2、001.4—2001给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。本标准主要起草人：孟日增、王宁、丁旭、刘韬、宋战均、刘金华、蔡阳、罗雁非。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1607—2012本标准仅供内部使用不得翻印化妆品中单核细胞增生李斯特氏菌检测1范围本标准规定了单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法。本标准适用于化妆品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应

3、用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB7918.1化妆品微生物标准检验方法总则3试剂和材料3.1水：为符合GB/T6682的灭菌二级水。本标准仅供内部使用不得翻印3.2Half-Fraser培养基：见附录A.1。3.3Fraser肉汤：见附录A.2。3.4牛津琼脂（Oxford琼脂）：见附录A.3。3.5ALOA琼脂：见附录A.4。3.6胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TS

4、A-YE)：见附录A.5。3.7胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE)：见附录A.6。3.8绵羊血琼脂：见附录A.7。3.9糖类利用肉汤（鼠李糖和木糖）：见附录A.8。3.10CAMP（Christle，Atkins，Munch-Petersen）培养基及试验菌株：见附录A.9。3.11过氧化氢溶液：见附录A.10。3.12磷酸盐缓冲液（PBS）：见附录A.11。4仪器和设备4.1恒温培养箱：25℃±1℃，30℃±1℃，35℃±1℃。4.2恒温水浴锅：46℃±1℃。4.3均质器或灭菌乳钵。4.4显微镜：10X

5、～100X。4.5接种环、接种针。4.6灭菌试管：18mm～180mm。4.7灭菌吸管：10mL（具有0.1mL刻度）和1mL（具有0.1mL刻度）。4.8灭菌量筒：容量100mL和250mL。1DB22/T1607—20124.9灭菌培养皿：直径90mm～100mm。5检验程序本标准仅供内部使用不得翻印单核细胞增生李斯特氏菌检测程序见图1。检样（10mL）＋初次增菌培养基（Half-Fraser90mL）30℃±1℃培养24h±2h二次增菌培养基（Fraser10mL）选择性分离培养基（牛津、ALOA）35

6、℃±1℃培养48h±2h35℃±1℃培养48h±2h本标准仅供内部使用不得翻印选择性分离培养基（牛津、ALOA）接种木糖、鼠李糖35℃±1℃培养24h±2h35℃±1℃培养48h±2h木糖-，鼠李糖+接种木糖、鼠李糖35℃±1℃培养24h±2h纯化、鉴定木糖-，鼠李糖+纯化、鉴定图1单核细胞增生李斯特氏菌检测程序6操作步骤6.1样品稀释液制备按照GB7918.1中的规定执行。6.2增菌培养2DB22/T1607—2012初次增菌，取1:10样品稀释液10mL加到90mlHalf-Fraser液体培养基中，置3

7、0℃±1℃培养24h±2h。二次增菌，取0.1mL初次增菌的培养物，加入到10mLFraser培养液中，置35℃±1℃培养48h±2h。本标准仅供内部使用不得翻印6.3分离培养用接种环取培养过的Half-Fraser增菌液的表层培养物划线接种于牛津琼脂和ALOA琼脂两种选择性平板上。将二次增菌培养物按同样步骤，划线接种于牛津琼脂和ALOA琼脂选择性平板上。置35℃±1℃培养48h±2h。经48h恒温培养后，检查平板上有无可疑单核细胞增生李斯特氏菌菌落。培养24h的典型李斯特氏菌在牛津琼脂上为细小（1mm）的灰

8、色菌落，其外围有黑色晕圈，48h后菌落变暗，可见绿色光泽，直径约2mm，有黑色的晕圈并且中间凹陷。典型单核细胞增生李斯特氏菌在ALOA琼脂上为蓝绿色菌落，颜色较为鲜艳，菌落直径1mm，菌落较小，圆形规则，边缘整齐，有较为明显不透明晕圈。6.4糖发酵反应从每种选择性培养基的每一平板中选择5个以上疑似单核细胞增生李斯特氏菌的菌落。如果一只平板中少于5个疑似菌落，须确挑去所有菌落，分别接种在木糖和鼠李糖发