DB21∕T 2049-2012 动物尿液中9种β-受体激动剂检测 液相色谱-串联质谱法

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1、ICS65.120B46备案号：DB21辽宁省地方标准DB21/XXXXX—XXXX动物尿液中9种β-受体激动剂检测动物尿液中9种β-受体激动剂检测液相色谱-串联质谱法Determinationofβ-receptoragonistsinanimalurineLiquidchromatography-tandemmassspectrometry点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/XXXXX—XXXX前言本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口。本标准起草单位：辽宁

2、省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：王丽娜刘凯刘笑陈玉艳李延山杜柏林田晓玲郝利忠张明刘敬先徐丽佳苗翠李楠杨希国张秀琴刘颖马帅8DB21/XXXXX—XXXX动物尿液中9种β-受体激动剂检测液相色谱-串联质谱法1　范围本标准规定了动物尿液中苯乙醇胺A、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、西布特罗、喷布特罗9种β-受体激动剂的原理、试样保存、试样制备、试剂材料、仪器设备、操作方法、测定方法。本标准适用于动物尿液中苯乙醇胺A、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、西布特罗、喷布特罗

3、9种β-受体激动剂残留检测；本标准为确证方法，方法检测限为0.1µg/L，方法定量限为0.2µg/L。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法。3　原理样品经酶解后，加入高氯酸沉淀蛋白，离心后用固相萃取小柱净化，洗脱浓缩后用含0.2%甲酸水溶液溶解，供液相色谱-串联质谱仪进行检测，内标法定量。4　试样保存-20℃以下贮存。5　试样制备样品使用前放至室温，如有浑浊，

4、离心后取上清液备用。6　试剂和材料除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水应符合GB/T6682一级水的规定。6.1　甲醇：色谱纯6.2　0.2mol/L乙酸铵溶液（pH5.2）：称取乙酸铵15.4g至1L水中，调PH至5.2。6.3　氨水。8DB21/XXXXX—XXXX1.1　高氯酸。1.2　0.2%甲酸水溶液：取甲酸1mL，用水定容至500mL。1.3　5%氨水甲醇溶液：取氨水5mL与95mL甲醇混合。1.4　苯乙醇胺A、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、西布特罗、喷布特罗对照品纯度≥95.0%。1.5　

5、β-受体激动剂储备液的配制：分别精密称取9种β-受体激动剂，用甲醇配成浓度各约1mg/mL标准储备液，2℃-8℃冷藏保存，有效期1个月。1.6　混合对照工作液：分别吸取9种β-受体激动剂储备液，置于一棕色容量瓶中，用0.2%甲酸水溶液稀释成浓度为1μg/mL对照品工作液，2℃-8℃冷藏保存，有效期1个月。1.7　同位素内标：克伦特罗-D9、沙丁胺醇－D３、莱克多巴胺－D３、,苯乙醇胺Ａ－D３，纯度≥95.0%。1.8　同位素内标储备液：分别取四种同位素内标，用甲醇配成浓度约为10mg/mL。1.9　同位素内标工作液：分别取四种同位素内标储备

6、液，用0.2%甲酸水溶液稀释成浓度为40μg/L对照品工作液，2℃-8℃冷藏保存，有效期1个月。1.10　固相萃取小柱：混合型阳离子交换柱，3mL/60mg，或其他类似性能小柱。1.11　氮气：纯度99.9%。2　仪器和设备2.1　液相色谱-串联质谱仪（配有电喷雾电离源）。2.2　涡旋混合器。2.3　离心机：转速大于7000r/min。2.4　微量移液器：100µL。2.5　旋转蒸发仪。2.6　天平：感量0.0001g。2.7　滤膜：0.22µm，水系。3　操作方法3.1　提取取备用液（5）5.0mL于50mL离心管中，添加内标工作液100

7、µL，充分混匀。加入40μLβ-葡萄糖醛酸-芳基硫酸酯酶，15mLpH5.2醋酸铵缓冲溶液（6.1.2），37.0℃震荡水浴16h后，加入0.5mL高氯酸，涡旋混匀，10000r/min离心5min。3.2　净化8DB21/XXXXX—XXXX固相萃取小柱用3mL甲醇，3mL水，3mL2%甲酸水溶液活化，备用液（8.1）过柱，3mL2%甲酸水溶液，3mL甲醇淋洗。空气抽干。5mL氨水甲醇溶液（6.6）洗脱。收集洗脱液，40℃氮气吹干后，1.0mL0.2%甲酸水溶液（6.5）溶解，经0.22µm滤膜过滤后进样测定。1.1　测定1.1.1　液相

8、色谱条件a)色谱柱：C18100mm×2.1mm，粒径1.7µm。或其他效果等同的C18柱；b)柱温：40℃；c)进样量：10µL；d)流动相：A:甲醇；B：0.1%甲酸水溶液；