DB12T 465-2012 预防性健康检查 粪便中沙门氏菌、志贺氏菌的检测方法

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1、ICS13.100C75DB12天津市地方标准DB12/T465—2012预防性健康检查粪便中沙门氏菌、志贺氏菌的检测方法DetectionmethodsofSalmonellaandShigellawhoneedtopasspreventivehealthcheck2012-11-14发布2013-02-15实施天津市质量技术监督局发布DB12/T465—2012前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的标准文本的格式和文字进行编写。本标准由天津市南开区疾病预防控制中心提出。本标准起草单位：天

2、津市南开区疾病预防控制中心、天津正大乾坤生物科技有限公司。本标准主要起草人：柳光斌、陈金枝、庞作章、马均彪、王楠、于磊、沈宗林。IDB12/T465—2012引言本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到6.1.2条采便管与微生物采样增菌培养管内容的采便套管和采便棒相关的专利的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得

3、：专利持有人姓名：马均彪地址：天津市南开区东马路新安花园A-1-604请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。II学兔兔www.bzfxw.comDB12/T465—2012志贺氏菌的检测方法志贺氏菌的检测方法1范围本标准规定了预防性健康检查粪便中沙门氏菌、志贺氏菌的检测方法的术语和定义、设备和实验器具、培养基和试剂、检验程序、操作步骤以及结果报告。本标准适用于疾病预防控制机构和医疗机构对食品、公共场所等行业从业人员，进行沙门氏菌和志贺氏菌健康带菌者的检测和确认。2术语和定义下列术语

4、和定义适用于本文件。2.1采便管Collectingpipe由采便套管和采便棒构成的采便装置，采便套管内装有经钴60辐射灭菌的SN液体增菌液培养基。2.2带菌者Carriers无任何临床表现，从粪便中分离到沙门氏菌（伤寒和副伤寒菌）或志贺氏菌的人群。3设备和实验器具3.1冰箱：4℃～8℃。3.2恒温培养箱：36℃±1℃。3.3电子天平：感量0.1g。3.4锥形瓶:容量500mL，250mL。3.5无菌培养皿：直径90mm。4培养基和试剂4.1沙门氏菌和志贺氏菌增菌液（SN）：见附录A中A.1。4.2沙门氏菌、志贺氏菌（SS）琼脂培养基：

5、见附录A中A.2。4.3HE琼脂：见附录A中A.3。4.4木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录A中A.4。1学兔兔www.bzfxw.comDB12/T465—20124.5克氏双糖铁琼脂（KIA）见附录A中粪便A.5。4.6三糖铁（TSI）琼脂：见附录A中粪便A.6。4.7动力-吲哚-尿素（MIU）培养基：见附录A中A.7。4.8蛋白胨水、靛基质试剂：见附录A中A.8。4.9氰化钾（KCN）培养基：见附录A中A.9。4.10赖氨酸铁琼脂（LIA）：见附录A中A.10。4.11糖发酵管：见附录A中A.11。4.12邻硝基酚β-D半乳

6、糖苷（ONPG）培养基：见附录A中A.12。4.13半固体琼脂：见附录A中A.13。4.14丙二酸钠培养基：见附录A中A.14。4.15沙门氏菌属O、H和Vi诊断血清。4.16志贺氏菌属诊断血清5粪便中沙门氏菌、志贺氏菌的检验程序沙门氏菌、志贺氏菌的检验程序见图1：2学兔兔www.bzfxw.comDB12/T465—2012粪便采集接种SN增菌液36℃±1℃18h～24hHE或XLD或SS琼脂平板和麦康凯琼脂平板分离36℃±1℃18h～24h挑取可疑菌落接种KIA或TSI，及MIU、LIA36℃±1℃18h～24h血清学分型系统生化鉴

7、定报告图1沙门氏菌、志贺氏菌检验程序图6操作步骤6.1粪便标本采集6.1.1肛拭子采便手持灭菌直肠棉拭子先用无菌生理盐水中浸湿，由肛门插入直肠3cm～5cm处，旋o转360采集后，将棉拭子手持端折断弃去，棉拭子端放入灭菌的SN增菌液培养管中。o6.1.2采便管采便手持采便管中的采便棒由肛门插入直肠3cm～5cm处，旋转360采集后，将采便棒放入灭菌的SN增菌液培养管中。6.1.3现场留便体检者在现场自行留取约1g粪便并及时接种灭菌的SN增菌液培养基中。6.2增菌3学兔兔www.bzfxw.comDB12/T465—2012将肛拭子采便或

8、采便管采便或自行留便的SN增菌液培养管，置36℃±1℃，培养18h～24h。6.3分离分别用接种环取增菌液一环，划线接种一个HE琼脂平板或XLD琼脂平板或SS琼脂平板和麦康凯琼脂平板，于36℃±1℃培养18