组培+3、培+养+基(1)

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1、3.培养基3.1培养基的种类和命名最早的培养基：1860年Sackst和1861年Knop设计的营养液30-40年代设计的培养基：White(1943)，Gautheret(1939)50年代：Heller(1953)60年代设计的培养基：White(1963),MS(1962)（MurashigeandSkoog(1962)）,Nitsch(1969),N6(1974)培养基的命名：发表人+发表年号常用培养基及其特点：第一类：高盐培养基MS（Murashige和Skoog,1962)LS（Linsmaier和Skoog,1965),BL(BrownandLawrence,1

2、968),第二类：高硝酸盐培养基B5N6SH(SchenkHildebrandt,1972)常用培养基及其特点：第三类：中盐培养基H（Bourgin和Nitsch,1979),Nitsch(1969)第四类：低盐培养基White(1943),WS(WolterSkoog,1966),HE(Heller,1953)3.2培养基的成份3.2.1无机营养成份大量元素：氮、磷、钾、钙、镁、硫（浓度大于0.5mmol/L)微量元素：铁、锰、铜、锌、硼、氯、碘、钼、钠(浓度小于0.5mmol/L)3.2培养基的成份关于硝酸盐和铵盐当作为唯一氮源时硝酸盐比铵盐好，但单独使用培养基的PH会向

3、碱性漂移，加入少量的铵盐或还原态氮源可阻止漂移。关于铁盐（Fe2（SO4）3，FeCl3FeSO4·7H2O）铁需在偏酸的环境中才被组织吸收，解决策略是以螯合形式出现3.2培养基的成份关于螯合铁盐用FeSO4·7H2O和Na2·EDTA制备，方法：Na2·EDTA：ethylenediaminetetra-acid（乙二胺四乙酸）缺元素愈伤组织的表现氮:不能形成导管,有花色素色彩氮、钾或磷:细胞过度生长,形成层组织减退硫:非常明显地褪绿铁：细胞分裂停止硼：细胞分裂停滞，细胞伸长锰或钼：影响细胞伸长3.2培养基的成份3.2.2有机营养成份（1）维生素：硫胺素（VB1),吡哆醇（

4、VB6）维生素C（VC），烟酸（PP或VB3）等（2）氨基酸：甘氨酸，水解酪蛋白（CH）等（3）肌醇（4）碳源：蔗糖，葡萄糖（5）天然复合物：椰乳（CM），香蕉，马铃薯，酵母提取液（YE）3.2培养基的成份3.2.3其它成份（1）植物生长物质（2）活性炭（AC）：（3）凝固剂（4）其它关于植物生长物质植物激素：又称内源激素，是植物体内天然存在的代谢物质。（细胞分裂素，生长素，赤霉素，脱落酸和乙烯）植物生长调节剂：为人工合成的有机化合物，具有促进、抑制或以其它方式改变植物某一个生理过程的功能。植物生长物质：植物激素和植物生长调节剂的统称生长延缓剂：矮壮素，多效唑(PP333)生

5、长抑制剂：脱落酸(ABA)3.2.3植物激素（植物生长调节剂）（1）细胞分裂素：6-BA（6-苄基氨基嘌呤）；KT（激动素）;ZT（玉米素）；2-ip（异戊烯基腺嘌呤）;PBA（多氯苯甲酸）;TDZ不溶于水，用1NHcl或1NNaoH助溶；作用效果：Zt>2-ip>6-BA>Kt（2）生长素：NAA（萘乙酸），IAA（吲哚乙酸），IBA（吲哚丁酸），2，4-D，GA3（赤霉素）;不溶于水，用95%洒精或1NNaoH助溶；作用效果：2，4-D>NAA>IBA>IAA3.2.3植物激素（植物生长调节剂）关于IAA（吲哚乙酸）：●IAA贮备液在几天内发生光解，变成粉色，须置于棕色瓶

6、中，贮存时间最好不超过一周●因高温会破坏IAA的结构（热不稳定性），IAA需采用过滤灭菌3.2.3植物激素（植物生长调节剂）关于赤霉素（GA3）：●因高温会破坏GA3的结构（热不稳定性），需采用过滤灭菌关于生长调节剂的配比细胞分裂素/生长素被称为组织培养的激素配比模式；细胞分裂素/生长素>1，有利长芽；细胞分裂素/生长素<1，有利长根；细胞分裂素/生长素配比的应用需注意其相对值，以低、中等含量为好；高浓度的细胞分裂素含量和高激素配比都可使培养物发生诱变；较易引起突变的激素：腺嘌呤，异戊基腺嘌呤（2-ip)，矮壮素等；3.2.4固化剂-琼脂、卡拉胶影响培养基凝固效果的因素：1、

7、卡拉胶含量；2、培养基的PH值，偏酸不利凝固；3、高压灭菌时间，过长影响凝固；3.2.5其它成份1.活性炭的作用：吸附功能；加入活性炭不利培养基凝固。2.硝酸银：抑制乙烯活性促进茎芽分化的作用使用浓度:1-10mg/L；过滤灭菌.3.2.5其它成份3.抗生素：常用的抗生素：青霉素、链霉素、土霉素等，用量：5-20mg/L；过滤灭菌3.2.6PH值一般为PH5.8左右3.3培养基的设计及配制设计内容：1、基本培养基的选择2、激素种类和配比3、蔗糖的浓度4、其它成份的添加5、PH值的确定设计方案的选择：3.