中药材提取物功能研究

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1、中药材提取物功能研究1材料1.1饲养动物选取体重在18~22g的雄性小鼠，小鼠及鼠粮购于兰州大学医学校区。木实验室饲养条件：饲养房温度控制在37°C,小鼠在专用鼠笼屮进行饲养，每天更换水瓶，每天添加鼠粮，垫料每两天更换一次。1・2实验器材毛巾、鱼网、卫生纸、医疗胶布、铅皮、凹形针、塑料桶、小太阳、热得快、小注射器、灌喂针、鼠笼、水瓶、计时器、锡纸、称量纸、滤纸、50mL冻存管管、5mL冻存管、冰盒、标记笔、Eppendorf管、酶标板、一次性试管、10mL玻璃试管、试管架、棕色试剂瓶、量筒、移液器及枪头、密封瓶、

2、保鲜膜、液氮罐。1・3实验仪器表i-i实验主婆仪器名称型号产地水迷宫电子天平CP214中国上海恒温水浴锅B-260中国上海紫外分光光度计754N中国上海荧光酶标仪1.4实验溶液及试剂牛理盐水、4%多聚甲醛固定液、■液氮、冰酩•酸、浓硫酸。(1)4%多聚甲醛固定液配制：NaH2PO4・2H2O2.964gNa2HPO4・12H2O29.010g多聚甲醛40gdH2O1000mL总量1L(2)A药配制：将A原液稀释一倍为I液A中浓度：取I液50mL,定容至200mL(按照需要剂量同比例缩小！下同);A高浓度：取II液

3、150mL,定容至200mLo(3)B药配制：将B原液稀释一倍为II液B中浓度：取II液60mL,定容至200mL；B高浓度：即II液。注意：毎次灌喂Z前盂要摇匀；剂量:0.2毫升/10克体重1.5实验所需试剂盒总抗氧化能力(T-AOC)测试盒、丙二醛(MDA)测试盒、超氧化物歧化嗨(SOD)测试盒、肝/肌糖原测试盒、活性氧(ROS)检测试剂盒及BCA蛋白定量试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。1.6实验经费表1-2实验经费表名称单价数量总价实验小鼠5.00140700.00鼠粮1袋毛巾2条卫生纸1袋医用胶布铅皮

4、1.003条3.00塑料桶4个电暖气1台热得快2个生理盐水5.004瓶20.00锡纸50.001卷50.00液氮10.0010L100.00酶标板(96孔)30.002板60.00一次性试管5包量筒冰醋酸(500mL)1瓶浓硫酸(500mL)1瓶移液器(0~5000mL)保鲜膜3.001卷T-AOC测试盒150.002盒300.00MDA测试盒250.002盒500.00SOD测试盒500.002盒1000.00肝/肌糖丿京测试盒160.002盒320.00ROS检测试剂盒680.002盒1360.00BCA蛋白

5、定量试剂盒2盒2方法2.1小鼠体重进行称量先将购买的实验小鼠适应性喂养Id,然后将小鼠随机分为6组：A药高浓度组、A药中浓度组、B药高浓度组、B药中浓度组、正常对照组及训练对照组。每周用电子天平对小鼠体重进行称量一次并纪录数据。并由称得的体重计算得出小鼠的灌喂量。2.2中药材提取物灌喂小鼠木实验对两种中药材提取物进行试验，分别编号A药和B药。中药材提取物分为两种浓度：中剂量组药浓度为0.66g/mL,高剂量组药浓度为2.00g/mLoA药高浓度组、A药中浓度组、B药高浓度组、B药中浓度组分别灌喂相应药物。正常对照

6、组灌喂生理盐水。训练对照组不灌喂。每周灌喂6天，休息1天。小鼠灌喂方法：右手抓住小鼠尾巴，让其前爪抓在鼠笼上，左手拇指及食指捏住小鼠耳朵部位，屮指及无名指小心捏住小鼠后背，小指压其尾巴；右手拿注射器从小鼠上频靠小鼠后背食管缓慢插入灌喂针后并缓慢注入药物或生理盐水。注：千万要找准部位后再注入药物，很容易注入到气管屮；插入注射器一定要轻缓，很容易伤到小鼠内部结构。2.3小鼠负重游泳训练用塑料桶作为游泳池，力探约35cm,水温控制在34土2°C范阖内，每天换水，每组各一个游泳箱；首先将小鼠进行适应性游泳2d,首次游泳2

7、0min,1次/d；在小鼠尾部距离尾巴2-3cm处粘上医用胶布并开孔，然后根据小鼠当时体垂用在胶布上挂5%重量的回型针。每周游泳6天，休息1天。游泳结束后将胶布及回型针取下，用毛巾和纸巾将小鼠身上的水擦干后放于电暖气下烘烤，待完全干后放冋笼中正常饲养，每天游泳一次，游泳时间每周递增，依次为：5niin、8min.12min>15mino2.4小鼠力竭游泳待小鼠负重游泳训练4周后，进行力渴游泳。将小鼠放丁•水迷宫中，水深约35cm,水温控制在34土2°C范韦内。力竭判断标准为：以小鼠头部全部入水持续8s不能游出水面

8、为判定终点。力竭游泳按组进行，纪录各组力竭游泳时间。2.5样本采集与处理2.5.1血液采集采用摘除眼球采血方法进行血液采集。方法如下：(1)•小鼠力竭游泳后，摘除小鼠眼球采血。每只小鼠可取1.5—2.OmL血液;(2).3500rpm离心15min;(3).取上清4°C保存；预留一•部分送医院作血常规检测。2.5.2取脑血液采集后小心用钱了抛离颅骨斤，取出脑肩用锡纸包裹后