第16章临床电泳分析仪器教学指导

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1、第十畠索临冻电泳今祈仪器首页基本要求重点难点讲授学时内容提要1.基本要求1.1了解1.1.1常用的电泳仪简介1.1.2电泳仪的技术主要指标1.1.3电泳仪临床应用1.2熟悉1.2.1毛细管电泳仪基本工作原理1.2.2毛细管电泳仪的基本结构1.2.3常用电泳方法1.2.4常用电泳仪设备1.2.5常用电泳仪的基本结构1.3掌握1.3.1电泳基本原理1.3.2影响电泳的外界因素1.3.3毛细管电泳的特点1.3.4毛细管电泳分离模式1.3.5电泳仪的维护保养及故障排除2.重点难点2.1重点2.1.1电泳基本原理2.1.2毛细管电泳分离模式2.1.3毛细管电泳的特

2、点2.1.4影响电泳的外界因素2.2难点2.2.1常用电泳方法2.2.2毛细管电泳分离模式2.2.3电泳仪的维护保养及故障排除3•讲授学时建议2〜3学时4.内容提要4.1电泳原理4.1.1电泳基本原理物质分子在正常情况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，因此可使它们分离。若溶液里一电量为0的带电粒子，在场强为E的电场屮以速度"移动，则它所受到的电场力尸应为：F=QE

3、（16-1）根据斯托克司定律，在液体中泳动的球状粒子所受到的阻力尸’为：F'=6龙nru（16-2）式屮4为介质的粘度系数，厂为粒子半径。当二力平衡，即尸=尸'时，粒子作匀速泳动，且有v=QE/^7tnr（16-3）4.1.2影响电泳的外界因素电场强度、溶液的pll值、溶液的离子强度、电渗作用、粒子的迁移率、吸附作用。4.2常用电泳仪方法电泳技术发展迅速，方法种类繁多，以下简单介绍几种电泳方法。4.2.1纸电泳纸电泳（PE）是指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳，由于操作简单方便，因此在很多领域得以广泛应用。比如，分离、确定某些蛋白质，如

4、糖蛋白、脂蛋白等，尤其是在分离氨基酸的混合物时，PE是一种很有价值的分析技术。在这种平卧式滤纸电泳装置（见图6-2）屮，将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之I、可，样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压（100V〜1000V）进行电泳。4.2.2醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的疑基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量

5、异常蛋白的检测。4.2.3凝胶电泳由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式，被称为凝胶电泳。因此，该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。4.2.4等电聚焦电泳等电聚焦电泳是20世纪60年代屮期问世的，一种利用有pH值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。因为这种电泳方法具有很高的分辨率，所以在等电点上只要有O.OlpH单位的差异就能被满意地分离。因此，特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。等电聚焦电泳法的特点①使用两性载体电解质，在电极Z间形成稳定、连续

6、、线性的pH梯度;②由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面;③电泳速度快;④分辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择;⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶等)生物组分的分离分析。4.2.5等速电泳等速电泳(C1TP)是一种“移动界面”电泳技术。是电泳屮惟一的分离组份与电解质一起向前移动,同时进行分离的电泳方法。同等电聚焦电泳一样，等速电泳在毛细管中的电渗流为零，它采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。图6-3是阴离子等速电泳示意

7、图。CITP适用于小离子、小分子、肽类及蛋白质的分离。样品O尾随电解质怎前导电解质®o§©图16-2阴离子等速电泳示意图等速电泳特点：一是所有谱带以同一速度移动。二是区带锐化。三是区带浓缩。4.2.6双向凝胶电泳（二维电泳）双向凝胶电泳（two-dimensionalgelelectrophoresis,2-DE）技术乂称二维凝胶电泳技术，是目前常用的唯一一种能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的方法，第一向采用等电聚集电泳。第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳。广泛应用于生物学研究的各个领域，其原理是将高分辨率的等电聚集电泳和SDS-PAGE

8、电泳联合组成双向电泳。4.2.7免疫电泳免役电泳是电泳分析与沉淀反应的结合产物。