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1、蛋白酶产生菌的筛选.鉴定及酶学性质研究■农学论文蛋白酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质研究李婵娟1,王婿2，杨洁2（1.华中农业大学楚天学院，武汉430205;2.湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术硏究所，武汉430064）摘要:采用干酪素平板透明圈法从垃圾附近的土壤中分离得到1株产蛋白酶的优良菌株，通过测定其16SrDNA基因序列，鉴定该菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa^以酪蛋白为底物对该产蛋白酶粗酶液进行了酶学性质研究，结果表明，该酶最适反应pH为8.5,为碱性蛋白酶；在pH6.0~9.0的缓冲液中于4°C放置12h后仍有90%以上的酶活
2、性，说明该酶在中性和碱性条件下非常稳定。该酶最适反应温度为55°C,在70°C和80°C处理30min后仍分别保有68%和45%的残余酶活性，从而表明该酶具有较好的热稳走性。Mg2+和Fe2+对该酶活性几乎没有影响，K+和Mn2+对该酶活性有轻微的抑制作用zEDTA对该酶活性有明显的抑制作用；Cu2+对该酶活性也有26%的抑制作用,只有Ca2+对该酶活性有10%左右的促进作用。关键词：蛋白酶产生；分离；鉴定；酶学性质中图分类号:Q814.1文献标识码:A文章编号：0439・8114(2015)19・4794-04D01:10.14088/j.cnki.issn0439-
3、8114.2015.19.035Iso1ationandIdentificationofAProtease-ProducingBacteriaandCharacterizationofItsProteaseLIChan・juanl,WANGJing2,YANGJie2(1.ChutianCollege,HuazhongAgricu1tura1University,Wuhan430205zChina;2.InstituteofQualityStandardandTestingTechnologyforAgro・Products,HubeiAcademyofAgricult
4、uralSciences,Wuhan430064,China)Abstract:Abacteriumproducinghighproteasewasisolatedfromsoilaroundthedumpbymethodofcaseinplate.ThestrainwasidentifiedasPseudomonasaeruginosabymeasuringits16SrDNAsequence.Thecharacteristicsofthecrudeproteaseproducedbythisstrainwerestudiedbyusingcaseinasthesub
5、strate.TheresultsshowedthatthecrudeproteasedisplayedthemaximumactivityatpH8.5,therefore,thisenzymewasanalkalicprotease.Thecrudeenzymestillhad90%ofthehighestactivityafterovernightincubationat4°C,pH6.0~9.0,indicatingthattheenzymewasverystableunderneutra1oralkalineconditions.Theoptimumtempe
6、ratureoftheenzymewas55°C.Afterincubationat70°Cand80°Cfor30min,itremained68%and45%ofthehighestactivity,respectively,sotheproteasewasconsideredtohaveasuperiorthermalstability.Theactivityoftheproteasemaybedependentondivalentmetalions,becauseitwasnotaffectedbyMg2+orFe2+andwasslightlyinhibite
7、dbyK+andMn2+,butwasobviouslyinhibitedbyEDTA,strong1yinhibitedbyCu2+,reducingby26%ofitsactivity,andonlyCa2+cou1dincreasedtheactivityby10%.Keywords:protease-producingbacteria;isolation;identification;enzymaticproperty收稿日期：2015・06・15基金项目：湖北省农业科技创新中心资助项目（2014・620-000・001）作者简介
