实验二+植物病害组织分离培养技术及植物病害症状观察

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1、实验二植物病原真菌组织分离培养技术及植物病害症状观察一、实验目的和要求：1.掌握植物病害组织分离、无菌操作及常用病原物的培养和保存方法。2.通过观察植物病害的典型症状，初步掌握植物病害的症状特点，并学习植物病害症状的描述方法。二、材料及用具（1）植物病害组织体（自备），PDA平板培养基（已做好）。（2）超净工作台（内有75%酒精（内放脱脂棉球）、解剖刀、手术剪、镊子、酒精灯、培养皿、灭菌纱布（2块5cm×5cm）、培养皿（9cm）120套（2个班，2皿/人），5%乳酸瓶（60ml），1%漂白粉（0.1%升汞）瓶，无菌水、火柴等。三、实验内容操作方法步骤：1.植物组织体的选择：

2、选择发病植物体，发病部位病健交界处明显，新鲜的植物组织体作为实验材料。2、分离过程：1）实验进行前先把周围环境洒上少许水，地面洁净，把超净台面擦干净，打开超净台的紫外灯照射20－30分钟，然后关闭紫外灯，打开鼓风机，点燃酒精灯。2）培养基在微波炉融化后，在超净台上把培养基倒入灭菌的培养皿内，12ml/皿（为防止细菌污染，倒平板前每三角瓶内加5%乳酸4-6滴），放置片刻待培养基自然冷却。注意此步操作应在酒精灯附近进行。3）植物病害标本，用自来水冲洗干净，放入接种箱内；双手用70%酒精棉球擦拭消毒后，伸入接种箱内开始操作。4）打开3个培养皿（无菌的），依次倒入70%酒精、1%漂白

3、粉、无菌水；取出灭菌解剖刀，蘸70%酒精并过酒精灯火焰后，待刀片冷却后切取所需植物组织体，在病健交界处剪切成3mm2的大小（保证每人6块，3块/皿），用纱布包好，分别于70％酒精中浸5秒后，再在1%漂白粉（0.1％升汞溶液）中浸3－5分钟进行表面充分消毒，而后用灭菌水冲洗3次。5）用消毒镊子将植物组织块（在干的无菌纱布中吸去多余的水分），移至PDA培养基平板上，3块/皿。6）将接种好的平板做好标记，置于25℃培养箱内培养48小时后观察结果。玉米小斑病棉花轮纹病要求：本次实训操作要求细心，规范，快速，准确注意（1）工作环境的清洁和消毒（2）分离用具的消毒（3）分离材料的选择植物

4、病害症状观察植物病害病状类型●变色●坏死●腐烂●萎蔫●畸形植物病害症状观察●变色初始症状褐色小点，有晕圈中期症状褐色斑点，有晕圈后期症状叶正面点状物散生排列（分生孢子盘）坏死同心轮纹形病斑①同心轮纹型：发病初期，正面出现黄褐色小点，逐渐扩大成圆形，暗褐色、周围黄色、外有绿色晕的病斑，病斑中出现同心轮纹状排列的黑色小点。叶背面病部为暗褐色，周围浅褐色，无明显边缘。②针芒型：病斑似针芒向外扩展，无一定边缘，病斑小，但数量多，遍布叶片，后期叶片渐黄，病斑周围及背部保持绿色。③混合型：病斑很大，近圆形或不规则形，其上亦有小黑粒点，但不明显地排列成同心轮纹状，病斑暗褐色，后期中心为灰白

5、色，但边缘有的呈绿色。混合型，形状不规则。病斑较大，在叶边缘及内均发生梨黑星病病害发生在主干和大枝上。（1）在光皮杨树品种上，多围绕皮孔产生直径1厘米左右的水泡状斑；（2）在粗皮杨树品种上，通常并不产生水泡，而是产生小型局部坏死斑；（3）当从干部的伤口、死芽和冻伤处发病时，形成大型的长条形或不规则形坏死班。桃穿孔病细菌穿孔病霉斑穿孔病褐斑穿孔病菠菜猝倒病大白菜软腐病茄子青枯病枣疯病症状：芽不正常萌发与生长所引起的枝叶丛生，以及嫩叶的明脉、黄化和卷成匙形等。病株花器各部分的着生部位不变。花器返祖现象表现为花梗变长，花瓣变成小叶，有时变成小枝条，有时则不发生变态；雌蕊变成小枝条，

6、其腋芽往往萌发，生成短而细的小枝。后来除了雌蕊变成的小枝和萼片腋芽萌发生成的枝条外，其余各部分大都脱落。这样，果实就为小枝所取代，形成结果枝上的丛生症状。番茄根结线虫病桃树缩叶病作业（1）叙述植物病害组织分离技术的操作要点及操作过程中注意的事项。（2）观察分离培养的结果，分析成败原因。（3）植物病害症状观察表：（五种病状类型各选一代表）病害名称发病部位病状类型病症类型