细菌内毒素检查法研究中应注意的几个方面

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1、栏目标题作者部门正文内容化药药物评价>>化药质屋控制细菌内毒素检查法研究屮应注意的几个方而李霞张哲峰审评三部李霞张哲峰摘要：本文通过审评中发现的一些问题，结合商品检验的工作实际，对细菌内毒素进行方法学验证的重要性、必要性以及在技术市评中应关注的儿个方曲进行了全面阐述。关键词：细菌内毒素、约品中报、技术审评热原检查法和细菌内毒素检查谿典附录并没冇统一的给药剂量和标准限度，均在各站种项下具体规定，故是否能有效地保证临床用药的安全性，其标准限值是我们在制订质最标准时首先要关注的。对于内毒素限值的确定，约典附录有相应计算公式，即当

2、今世界各国普遍釆用的细菌内毒素计算公式,即：L二K/M,式中K为按规定给药途径,人每公斤体重每小时可以接受的不产生任何不良反应的细菌内毒素剂量（亦称致热阈），它基本上是一固定值，谿典上对每一给药途径的K值都冇具体的规定。M为按规定的给药途径，人每公斤体重每小时给药的最大剂量。这一个值的确定实际上才是计算限值的关键。原则上一般根据药品使用说明书來确定最人剂量。通常以一次剂量为准，如注明输2小时，则除以2,否则均以1小时为准；不足1小时的，也以1小时计；如未给岀一•次剂量，而是一F!剂量，如一FI2〜4g,分2〜4次用，这种悄

3、况以计算后的最人剂量，即2g/次计算。用法用罐屮有成人剂量、儿童剂量、重症剂量时，要体现出最大剂量。通常儿童剂量以Kg计算时大于成人剂量，所以，此时应用儿童剂量，因为儿童与重症病人更易出现问题，故应更严格。用于感染、肿瘤、心血管、中枢疾患易感的药物建议加上安全系数。复方、输液、工艺易污染者从严，人输液一般计为0.5EU/mL有时候，细菌内毒素限值也以国外约典为参考，甚至就直接采用国外药典的限值。这一点在实际应用的时候，必须从中国的临床用药的实际出发，不能不加区分地把同品种中国外药典规定的限值移至中国药典，总的原则是，对这一

4、类国外药典已建立细菌内毒素检杳法的品种，原则上要求将国外药典规定的限值为按公式计算出的数值进行比较，一般应以严格者为该品种的限值。期外以热原剂量作参考的问题，现在原则上已不再考虑热原的剂量。但大容量输液细菌内毒素限值为0.5EU/ml,主要是山热原试验中以10ml/kgiv家兔剂量得出的。细菌内毒素的限值确定后，需耍关注的第二个方面就是细菌内毒素方法学研究问题。在申报资料中，无论是仿制药还是创新商，申请人一般均会提供有关物质、溶出度、含量测定等主要检测项目的方法学研究资料，而对于细菌内毒素检查，给予的关注似乎要少得多，而中

5、报资料中提供了这方面资料的也少之乂少。实际上，处方工艺的改变对检测方法所带來的影响，对有关物质、溶出度、含量测定等项hl的影响绝对不会比对细菌内毒索检查法带来的影响大，因为，细菌内毒素检查法实际是一•种较为特殊的检查方法，中国药典2005年版对什么时候该进行细菌内毒素的干扰试验进行了札I关规定[11:当进行新药的细菌内毒素检查试验前，或无细菌内毒素检查项的品种建立内毒素检杏法时，须进行干扰试验。当蛍试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境屮发生了任何有-可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。所谓干扰试验，换句话说

6、就是方法的可行性试验。从药典对它的要求可以看岀，不论是新药，还是已有国家标准的仿制药，只要须控制细菌内痔素的,有这样一项检查项的，均应在质量研究屮对其方法的可行性进行验证。在以往工作中遇到的一个实例可以对其进行说明，我们曾经对硫酸头抱匹罗这个品种进行标准复核，结果发现不同厂家的硫酸头抱匹罗，儿乎相同的含量、相同的工艺，对其细菌内毒索检查所产生的干扰情况却存在较人的差別，通过进一步的试验研究，结果发现造成这种结果最大的可能是山于生产过程中引入的微量杂质的不同所引起的。这个例了进一步说明了在屮报资料屮提供细菌内毒素方法学研究资

7、料的必要性O进行内毒素干扰试验时，首先要确定限值，然后采用至少两个厂家的堂试剂进行干扰预试验，得到一•最犬不干扰浓度或最小稀释倍数后，即可用这一最大不干扰浓度进行止式的干扰试验。预试验一般不耍以市售蛍试剂灵敏度计算所得的MVD作为起始浓度來做。注射液建议以原液來做，粉针剂建议至少往上儿个浓度级来做，探索其干扰程度，如没冇干扰，方法则更可靠。在申报资料中经常会看见这种情况：就是研究者直接用灵敏度为0.06或0.03的蛍试剂进行试验，资料屮既不交代是否是由于样品有干扰，不能用高于此灵敏度的蛍试剂进行试验，或者是样品没有干扰，实

8、验者手中只有这种灵敏度的當试剂，审评人员根本无法根据资料情况判断样品本身是否产生了干扰？其引起干扰的浓度为多少？不产生干扰的样品的浓度又为多少？在此情况下，无法对方法的可行性作出判断。因为现在市售灵敏度最高的蛍试剂也就是0.03,而前面已经介绍了，生产工艺的细微变化都可能引起其干扰的增加，如果一个样品，