菌种室管理细则0

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1、菌种室管理细则0菌种室管理所有菌种均由菌种室专人保存于专用冰箱或其它保存方式。要建立菌种记录使用、处置情况；每一种菌种一定要有本公司的检测鉴定报告（具体的的鉴定方法见ATCC提供的菌种证书方法）；具体菌种保存方法如下：3.1干粉菌种：购买的干粉菌种保存于2-8°C冰箱中，可保存3・5年。3.2斜呦菌种或液体菌种：3.2.1液氮罐保存方法：用于第一代菌种的长期保存，每种菌种保存5管。（1）准备用于液氮保藏的安甑管或菌种保存管（塑料），要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安甑管，安咅瓦管的大小通常使用75X10mm的，

2、或能容1.2mm液体的。（2）加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌鞄子等容易分散的细胞时，则将空安甑管塞上棉塞，121°C灭菌15分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓶管内预先加入保护剂如10%的甘油蒸憾水溶液或10%二甲亚飒蒸镭水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限，而后再用121°C灭菌15分钟。（3）接入菌种：将菌种用10%的甘油蒸他水溶液制成菌悬液，装入己灭菌的安甑管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块,放入含有保护剂的安甑管内，然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。（4）冻结再将已封口的安甑管以每分钟下降1°C的慢速

3、冻结至・30°C。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。（5）保藏经冻结至・30°C的安甑管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150°C,液态氮内为-196°Co（6）恢复培养保藏的菌种需耍用时，将安甑管取出，立即放入38-40°C的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安甑管，将内容物移入适宜的培养基上培养。此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成砲子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异

4、。3.2.2液体石蜡保存法：将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，121°C灭菌30分钟，然后放在40°C温箱中，使水汽蒸发掉，备用。将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孑包子。用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端lcm为准，使菌种与空气隔绝。将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。1）大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、假单胞杆菌属、沙门氏菌属、副伤寒沙门氏菌、李斯特氏菌属、蜡样芽胞杆菌、八叠球菌、短芽孑包杆菌、大肠杆菌HB101＞大肠

5、杆菌DH5a、猪肺疫、禽多杀性巴氏杆菌（禽霍乱）、猪丹毒、大肠杆菌0157、大肠菌群、产气肠杆菌、志贺氏菌属；接种于半固体培养基上，36±1°C培养18・24小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2・8°C冰箱或室温中。可保存年。注：副溶血性弧菌接种于含盐的半固体培养基上，36±1°C培养18・24小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于室温。2）产气荚膜梭菌、梭杆菌属、拟杆菌属等厌氧菌、厌氧消化链球菌：接种于CDC厌氧菌琼脂中，培养1&24小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2・8“C冰箱或室温中。可保存1・2年。3）酵母菌:接种于YPD培养基中，28°C培养

6、24・48小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2・8°C冰箱或室温中。可保存年。4）霉菌、白色念珠球菌：接种于PDA培养基中，28°C培养24・48小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2・8°C冰箱或室温中。可保存「2年。5）链球菌属：接种于羊血琼脂,36±1°C培养24-48小时,加入无菌石蜡油覆盖，保存于2・8°C冰箱或室温中。可保存1・2年。6）副嗜血杆菌、淋病奈瑟菌（需5-10%CO2环境）、脑膜炎奈瑟菌（需5-10%CO2环境）、流感嗜血杆菌接种于巧克力琼脂，36土代培养24・48小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2・8°C冰箱或室温中。可保存

7、12年。7）分枝杆菌属：接种于改良罗氏琼脂或Middlebrook琼脂36±1°C培养7天，加入无菌石蜡油覆盖，保存于2・8°C冰箱或室温中。可保存1・2年。菌种室管理1、菌种室周围每周用84消毒液彻底喷雾消毒一次，没有硬化的地面，草丛花木等重点关注，尤其菌种室采风口附近。2、菌种室周围严禁存留、倾倒含有活菌的废液、废琼脂以及沾有菌液的物品等。3、菌种室周围经常打扫卫生，不允许堆放垃圾。4、菌种室附近下水道等每周清扫一次，下水道附近每周撒漂白粉一次。5、走廊、各操作室、办公室每天打扫卫生，每周消毒水拖地一次或洒消毒水一次。6、办公室内抹布、拖把

8、每周浸泡消毒一次，每次不少于1个小时，其他清扫工具可喷雾消毒一次。7、无菌室内不允许存有死角，内部物品尽量减少，室内消毒时注意物品挪动，不允许留有死角